موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:25 دقيقة • July 8th, 2025
البروتينات المرتبطة بالحمض النووي الريبي ، RBPs ، كمنظمات ما بعد النسخ من خلال الارتباط بمنطقة بدء الترجمة ، TIR ، من mRNA وقمع الترجمة.
لدراسة تفاعلات الحمض النووي الريبي-RBP عن طريق القمع الانتقالي لجين المراسل ، خذ مزرعة خلية بكتيرية تحتوي على بلازميدين - موقع الارتباط وبلازميدات RBP.
يقومبلازميد موقع الربط بتشفير جين مراسل الفلورسنت. عند النسخ ، يحتوي TIR الخاص ب mRNA الناتج على موقع ربط الريبوسوم وهيكل دبوس الشعر ، مع تسلسل معترف به بواسطة RBPs.
ترتبط الريبوسومات بموقع الارتباط على الرنا المرسال وتزعزع استقرار بنية دبوس الشعر ، مما يؤدي إلى ترجمة الرنا المرسال وتكوين بروتين مراسل الفلورسنت. يعبر بلازميد RBP عن RBP خيميري مدمج في بروتين فلوري مختلف. يتحكم المحفز المحفز في تعبير البروتين الخيمري.
أضف المحفز ، الذي ينشط عامل النسخ الذي يرتبط بالمروج ، مما يؤدي إلى تعبير البروتين الخيمري. يرتبط RBP للبروتين الخيمري ببنية دبوس الشعر. هذا يمنع الريبوسوم من الارتباط ب mRNA ، مما يمنع ترجمة بروتين المراسل.
مع زيادة تركيز المحفز ، يزداد إنتاج RBP ، مما يؤدي إلى تثبيط تنافسي أقوى لارتباط الريبوسومات ب mRNA.
قم بقياس إشارات التألق المختلفة من البروتينات الوهمية والمراسلة. ارسم الإشارات ، واحصل على منحنى الاستجابة للجرعة.
مع الزيادة بوساطة المحفز في إنتاج RBP ، يقلل القمع الانتقالي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية