موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:10 دقيقة • July 8th, 2025
يمكن أن تساعد البروتينات ذات نشاط الهيليكاز الحمض النووي الريبي في استرخاء وفصل جزيئات الحمض النووي الريبي الفردية في ازدواج الحمض النووي الريبي.
لتحديد نشاط الهليكاز للبروتين ، خذ أنابيب تحتوي على مزيج من دوبلكس الحمض النووي الريبي المسمى بالبيوتين مع مصائد 5 بوصات متدلية و ATPs و RNA - خيوط غير مصنفة مكملة للخيوط الحيوية للدوبلكس.
أضف البروتين مع نشاط الهليكاز إلى كل أنبوب واحتضانه لفترات مختلفة. يرتبط البروتين ب 5 's duplexs المتدلية.
باستخدام جزيئات ATP ، فإنه يكسر الروابط الهيدروجينية بين خيطين مزدوجين ، مما يؤدي إلى فكها وإطلاق الحمض النووي الريبي أحادي الشريطة الحيوي. تتفاعل مصائد الحمض النووي الريبي مع الخيوط المسماة بالبيوتين ، مما يمنع إعادة التلدين بالخيوط المنفصلة.
قم بإنهاء التفاعل باستخدام مخزن مؤقت للإنهاء.
قم بتحميل العينات في آبار مختلفة من هلام بولي أكريلاميد الأصلي. تشغيل الرحلان الكهربائي. يتحرك الحمض النووي الريبي أحادي الشريطة منخفض الوزن الجزيئي بشكل أسرع من الأحجار المزدوجة ذات الوزن الجزيئي المرتفع. يولد هذا التحول في التنقل شريطين متميزين.
امسح الجل على غشاء نايلون ، وانقل الحمض النووي الريبي إلى الغشاء. بعد النشاف ، قم بتعريض الغشاء لضوء الأشعة فوق البنفسجية ، وربط الحمض النووي الريبي بالغشاء.
أضف الستربتافيدين المترافق بالإنزيم الكيميائي ، والذي يتفاعل م
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية