موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 5:42 دقيقة • July 8th, 2025
فواصل الحمض النووي المزدوجة الناجمة عن الإشعاع ، أو DSBs ، في تجنيد بروتين إصلاح الحمض النووي في الموقع التالف - مما يؤدي إلى تنشيط إصلاح الحمض النووي.
للكشف عن بروتينات إصلاح الحمض النووي γH2AX و 53BP1 في مواقع DSB باستخدام التألق المناعي غير المباشر ، خذ أغطية تحتوي على خلايا ظهارية. تشعيع مجموعة فرعية من الخلايا. احتضان ، مما يسمح للتحكم بالخلايا غير المشعة والمشععة بالنمو لأوقات محددة.
عالج بمخزن مؤقت لاستخراج نوى الخلية. قم بإصلاح نوى الخلية للحفاظ على مورفولوجيتها. عالج بمحلول مانع لتقليل ارتباط الأجسام المضادة الأولية غير المحددة.
أضف الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف بروتيني إصلاح الحمض النووي. ترتبط الأجسام المضادة بالبروتينات المعنية.
احتضن بالأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفورات الحمراء والخضراء ، على التوالي. ترتبط الأجسام المضادة الثانوية - الخاصة بكل جسم مضاد أولي - بأهدافها. أضف وسيط التثبيت الذي يحتوي على DAPI على شريحة زجاجية. قم بتركيب الغطاء عليه للتصوير.
ترتبط DAPI - صبغة ملزمة للحمض النووي - بالأخاديد الصغيرة الغنية ب AT للحمض النووي المزدوج الشريطة ، مما يؤدي إلى تلطيخ النوى. تصور نوى الخلية باستخدام المجهر الفلوري.
بالمقارنة مع نوى الخلايا غير المشعة ، تظهر النوى المشعة بؤر γH2AX متعددة تتناقص بمرور الوقت ، مما يشير إلى إصلاح الحمض النووي التد
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية