موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 2:43 دقيقة • July 8th, 2025
تفاعلات البروتين والفوسفوليبيد على غشاء الخلية ضرورية لتنظيم العديد من العمليات الخلوية.
للكشف عن التفاعلات المستهدفة بين البروتين والفوسفوليبيد في المختبر باستخدام قياس التدفق الخلوي الكمي ، خذ أنبوبا يحتوي على التركيز المطلوب من تقليد غشاء الخلية - حويصلات الفوسفوليبيد المحبة للدهون بحجم ميكرون ، والمسماة بالصبغة - في المخزن المؤقت.
أضف تركيزا مناسبا من البروتينات المستهدفة المختلفة ذات العلامات الفلورية في المحلول.
حقن التعليق في مقياس التدفق الخلوي. اضبط معلمات نظام السوائل على معدل تدفق منخفض للسماح بوقت كاف لتفاعلات البروتين والفوسفوليبيد.
عندما تتفاعل البروتينات ذات العلامات الفلورية والحويصلات الفوسفوليبيد في قناة التدفق ، يزداد تركيز البروتينات المرتبطة بالحويصلات.
عندما تمر هذه المجمعات عبر أشعة الليزر من قنوات مضان محددة توفر أطوال موجية مناسبة ، فإنها تصبح متحمسة. تصدر هذه البروتينات المثارة والحويصلات الفوسفورية في المركب إشارات مضان ذات صلة عند الاسترخاء إلى الحالة الأرضية ، والتي يتم التقاطها بواسطة أجهزة الكشف المناسبة.
يدل اكتشاف متوسط شدة مضان مرتفع للبروتينات على ارتباط البروتين بحويصلات الفوسفوليبيد.
ابدأ تجارب الربط الحركي عن طريق تخفيف حويصلات الفوسفوليبيد في عازلة Tyrode إلى تركيز 1 ميكرومولار وحجم إجمالي يبلغ 250 ميكرولترا. بعد ذلك ، قم بخلط عامل التخث
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية