تصوير أحادي الجزيء لتصور تجميع مكثفات بروتين الاندماج على ستائر الحمض النووي

يحتوي

بروتين الاندماج الورمي الخيمري على مجال التعقيد المنخفض N-terminal ، LCD ، لبروتين مرتبط بالحمض النووي الريبي مدمج مع مجال ربط الحمض النووي ، DBD ، لبروتين عامل النسخ. تشكل هذه البروتينات مكثفا بروتيني ، والذي يجند بوليميراز الحمض النووي الريبي الثاني ويدفع تكوين الأورام.

لتصور تجميع مكثفات البروتين عن طريق التصوير أحادي الجزيء ، ابدأ بخلية تدفق الحمض النووي - شريحة زجاجية من السيليكا المنصهرة مزودة بمنافذ حقن مدخل ومخرج. سطح خلية التدفق مغطى بطبقة ثنائية دهنية بيوتينيل لحماية السطح وملفقة بحاجز متعرج.

قم بتوصيله بنظام الموائع الدقيقة. أدخل محلول الستربتافيدين ، الذي يرتبط برابط التقارب عالي الارتباط ، البيوتين ، على طبقة الدهون. حقن الحمض النووي لامدا مزدوج الشريطة الموسومة بالبيوتين ، والذي يحتوي على تكرارات متعددة لتسلسلات ربط بروتين الاندماج. يرتبط الستربتافيدين ذو الطبقة الدهنية بالبيوتين في الحمض النووي ويربط الحمض النووي لامدا بالطبقة الثنائية.

اتدفق مع مخزن مؤقت مناسب. تعمل القوة الهيدروديناميكية لتدفقها على تقويم جزيئات الحمض النووي المثبتة ، مما يسمح لها بالتعليق كسائر الحمض النووي فوق الحواجز.

ضع خلية التدفق تحت المجهر الفلوري. حقن محلول من الفلوروفورات الخضراء المرتبطة بالحمض النووي. بعد ذلك ، قم بحقن محلول من بروتين الاندماج الموسوم بالفلوروفور الأرجواني المرتبط