موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:19 دقيقة • July 8th, 2025
قليل البروتين هو مركب من وحدات فرعية متعددة للبروتين ترتبط ببعضها البعض لتشكيل وحدة وظيفية أكبر.
لتحديد الوزن الجزيئي لمونومرات البروتين وقليل القلة في المحلول بواسطة SEC-MALS ، وهو مزيج من كروماتوغرافيا استبعاد الحجم وتشتت الضوء متعدد الزوايا ، يبدأ بعمود كروماتوغرافيا استبعاد الحجم ، أو SEC.
يحتوي العمود على حبات هلامية كروية مسامية تشبه المنخل تحبس جزيئات أصغر حجما بداخلها. قم بموازنة العمود بمخزن مؤقت متوافق مع الحالة الأصلية للبروتين.
قم بتحميل عينة تحتوي على مونومرات البروتين والقلات في الجزء العلوي من العمود.
أثناء التدفق ، تمر القلة عبر مساحة الجسيمات الداخلية للعمود ، بينما تصبح المونومرات محاصرة داخل مسام الخرز. يؤدي هذا إلى انتقال أوليغومرات البروتين الأكبر حجما بشكل أسرع من المونومرات الأصغر حجما.
قم بتوجيه أوليغومرات سريعة التصريف ، متبوعة بالمونومرات بطيئة التصفية ، إلى كاشف MALS.
أثناء مرورها عبر الكاشف ، يضيء ضوء الليزر ، والذي ينتشر في زوايا مختلفة. تشتت أوليغومرات متعددة الوحدات الفرعية ضوءا أكثر من المونومر.
تتناسب شدة الضوء المتناثر بزوايا متعددة طرديا مع الوزن الجزيئي لبروتين أوليغومر والمونومر.
ابدأ هذا الإجراء بإعداد نظام SEC-MALS كما هو موضح في بروتوكول النص. باستخدام كواشف من الدرجة HPLC ، قم بإعداد لتر واحد من المحلول الملحي المخزن بالفوسفات مع 50 إلى 100
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية