موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 3:35 دقيقة • July 8th, 2025
لدراسة تفاعلات المستقبلات والترابط ، ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على وسائط مع خلايا مستهدفة تعبر عن روابط الاختبار على سطحها.
أضف خلايا فأر BW هندسيا - مجموعة جديدة من الخلايا البائية تعبر عن مستقبلات خيميرية مرتبطة بالغشاء. تشتمل المستقبلات الخيمرية على مجال خارج الخلية لمستقبل معين مدمج في مجال الإشارات عبر الغشاء وداخل الخلايا لمستقبلات الخلية البائية.
تتفاعل الروابط الموجودة على الخلايا المستهدفة مع المجال خارج الخلية للمستقبلات الخيمرية لخلايا BW ، مما يتسبب في تنشيط مجال الإشارات داخل الخلايا في خلايا BW. يؤدي هذا إلى تشغيل الإشارات النهائية وإنتاج السيتوكينات - جزيئات المراسل الإفرازي التي يتم إطلاقها خارج خلايا BW ، وتظهر في الوسائط.
الطرد المركزي اللوحة. انقل المادة الطافية المحتوية على السيتوكين إلى صفيحة ELISA مغلفة مسبقا بالأجسام المضادة للسيتوكين. تتفاعل السيتوكينات مع مناطق Fab في الأجسام المضادة ، مما يؤدي إلى تجميدها على سطح اللوحة.
عالج اللوحة بمحلول مانع لمنع مواقع الربط غير المحددة. أضف الأجسام المضادة للسيتوكين البيوتينيل ، والتي تتفاعل مع السيتوكينات المرتبطة مسبقا وتشكل مجمعات مناعية.
تراكب اللوحة بمحلول ستربتافيدين مترافق بالإنزيم. يرتبط الستربتافيدين بالبيوتين على المجمعات المناعية.
عالج اللوحة مع الركيزة. ينتج عن تفاعل الإنزيم والركيزة منتجا ملونا ، مما
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية