مسبار قوة الغشاء الحيوي لتقدير تفاعلات المستقبلات والترابط

يتسبب التفاعل بين مستقبل الخلايا التائية ، TCR ، والببتيد المستضد الذي يقدمه معقد التوافق النسيجي الكبير ، أو مركب التوافق النسيجي الرئيسي ، على خلية عارضة للمستضد ، APC ، في ممارسة الخلية التائية قوة ميكانيكية على APC. هذه الظاهرة ضرورية لتنشيط الخلايا التائية.

لتحديد التفاعلات بين المستقبلات والترابط باستخدام مسبار قوة الغشاء الحيوي ، BFP ، ابدأ بغرفة خلية مخصصة قائمة على الشرائح. ضع حجرة الخلية تحت المجهر.

حقن معلقات كرات الدم الحمراء المتورمة البيوتينيل ، ومسبار الخرز الزجاجي المطلي بمجمعات معقد التوافق النسيجي الكبير - الستربتافيدين - البيوتين المرتبطة بالببتيد ، والخلايا التائية في الغرفة. ضع المسبار والهدف والماصات الدقيقة المملوءة بالعازلة المساعدة حول الغرفة.

استنشق كرات الدم الحمراء الحيوية باستخدام ماصة المسبار، ووضعها في منطقة فارغة. استنشق خلية تائية باستخدام الماصة الدقيقة المستهدفة ، ووضعها على يمين كرات الدم الحمراء. استنشق حبة مسبار باستخدام الماصة الدقيقة المساعدة ، وقم بتثبيتها بقمة كرات الدم الحمراء. يرتبط ستربتافيدين الخرزة ببيوتين كرات الدم الحمراء ويشكل مسبارا للقوة.

قم بمحاذاة الخلية التائية مع مسبار القوة للسماح ل TCR بالتفاعل مع الترابط الخاص بها - الببتيد المرتبط ب معقد التوافق النسيجي الكبير - والخلية التائية لممارسة القوة على كرات الدم الحمراء. اسحب الخلية التائية لكسر رابطة ببتيد TCR ، التي تشوه كرات الدم الحمراء وتزيح الخرزة.

قم بقياس القوة اللازمة لكسر الرابطة - تحتاج الرابطة الأقوى إلى قوة أعلى ومزيد من الوقت للكسر ، مما يشير إلى عمر أطول.

لبدء تجربة BFP ، قم بتشغيل المجهر ومصدر الضوء. ضع الغرفة على مرحلة المجهر الرئيسية. الخطوة التالية هي تركيب جميع الماصات الدقيقة الثلاثة ل BFP. المسبار على اليسار هو الاستيلاء على كرات الدم الحمراء. الهدف على اليمين هو الاستيلاء على الخلية ، ويعمل المساعد في أسفل اليمين على الاستيلاء على حبة.

للتثبيت ، استخدم حاقن دقيق لردم ماصة دقيقة بمخزن مؤقت تجريبي. انزع الماصة الدقيقة عن حامل الماصة، واحتفظ بها في مكان منخفض للسماح للسائل بالتنقيط من الطرف. قم بإدخال الماصة الدقيقة بسرعة في طرف الحامل، مع التأكد من عدم دخول فقاعة الهواء الدقيقة إلى الماصة الدقيقة أثناء الإدخال.

اربط برغي الحامل، ثم قم بتركيب كل حامل ماصة على جهاز المعالجة الدقيقة المقابل له. ادفع الماصة الدقيقة نحو الغرفة بحيث تدخل أطرافها إلى منطقة الغرفة العازلة. اضبط موضع الماصة الدقيقة واعثر عليها تحت مجال الرؤية المجهري.

تحرك حول مرحلة حامل الغرفة للعثور على مستعمرات العناصر الثلاثة واحدة تلو الأخرى. اضبط موضع الماصة الدقيقة المقابلة عن طريق تدوير مقابض المعالجات للسماح لطرف الماصة الدقيقة بالاقتراب من خلية واحدة أو حبة واحدة. قم بشفط الخلية أو الخرزة عن طريق ضبط الضغط داخل الماصة الدقيقة المقابلة. ستلتقط جميع الماصات الدقيقة الثلاثة العناصر المقابلة لها.

تحرك حول مرحلة حامل الغرفة للعثور على مساحة مفتوحة بعيدا عن مستعمرات العناصر المحقونة حيث سيتم إجراء التجربة.

قم بتبديل الوضع المرئي للمجهر لتصور الصورة على برنامج الكمبيوتر. انقل العناصر الثلاثة الموجودة على أطراف الماصة إلى مجال رؤية البرنامج. بعد ذلك ، قم بمحاذاة حبة المسبار و RBC وقم بمناورة حبة المسبار بعناية إلى قمة كرات الدم الحمراء. الآن ، اصطدم الخرزة لفترة وجيزة بكرات الدم الحمراء والتراجع برفق.

اضبط ضغط الماصة الدقيقة المساعدة لتفجير الخرزة برفق بحيث تترك ملتصقة بقمة كرات الدم الحمراء. حرك الماصة الدقيقة المساعدة بعيدا ، وقم بمحاذاة الهدف ، ومسبار الخرزة.

في البرنامج، في نافذة مجال الرؤية، استخدم أدوات البرنامج لقياس أنصاف أقطار الماصة الدقيقة للمسبار وكرات الدم الحمراء ومنطقة التلامس الدائرية بين كرات الدم الحمراء وحبة المسبار. تسمح هذه القيم بتقدير ثابت الربيع لكرات الدم الحمراء بواسطة المعادلة المدرجة في بروتوكول النص.

بعد إدخال ثابت زنبرك RBC المطلوب في البرنامج ، ارسم خطا أفقيا عبر قمة كرات الدم الحمراء والتي ستنتج منحنى في النافذة المجاورة يشير إلى سطوع كل بكسل على طول هذا الخط. اسحب خط العتبة ليكون عند نصف عمق المنحنى تقريبا.

بعد ذلك ، حدد وضع التجربة المطلوب. قم بتعيين المعلمات حسب الرغبة. انقر فوق Start (ابدأ) الذي يسمح للبرنامج بتحريك الماصة المستهدفة ودفع الهدف إلى داخل وخارج ملامسة المسبار.

سيتم جمع البيانات بالتوازي الذي يسجل موضع حبة المسبار في الوقت الفعلي. أوقف البرنامج بالنقر فوق الزر إيقاف التجربة وفي ذلك الوقت ستظهر نافذة للسماح بحفظ البيانات المكتسبة.