موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 4:05 دقيقة • July 8th, 2025
البروتينات المرتبطة بالنيوكليوتيدات من الجوانين - وهي فئة من GTPases - كمحول جزيئي ، حيث تتنقل بين الشكل النشط المرتبط ب GTP والشكل غير النشط المرتبط بالناتج المحلي الإجمالي.
ترتبط GTPases النشطة بشركاء بروتين محددين. يتنافس هؤلاء الشركاء على نفس موقع الربط على GTPases.
لدراسة الربط التنافسي ، ابدأ بأخذ تعليق GTPase المرتبط ب GTP الذي يثبت جماله على الخرز المغناطيسي. أضف شريك التفاعل الأول - البروتين الموسوم بالفلورسنت أ. احتضن تحت التحريك لإبقاء الخرزات معلقة. يربط البروتين أ ويشبع مواقع الارتباط على جميع جزيئات GTPase.
قسم هذا الحل بالتساوي إلى أنابيب متعددة. أضف شريك تفاعل ثان - بروتين B الموسوم بالفلورسنت - إلى الأنابيب بكميات متزايدة. احتضان تحت التحريض.
يرتبط البروتين B بنفس موقع الارتباط على GTPases - مما يؤدي إلى إزاحة البروتين A بشكل تنافسي.
قم بتعريض الأنابيب لمجال مغناطيسي لجمع الخرز على جانب واحد. تخلص من المادة الطافية لإزالة البروتينات غير المرتبطة. أعد تعليق الخرزات المعقدة بالبروتين في مخزن مؤقت مناسب ، وحدد كمية البروتينات المقلدة.
ارسم الكثافة النسبية للبروتينات A و B المرتبطة ب GTPase عند كل تركيز من البروتين B.
يصل البروتين B إلى حالة توازن - يحتل مواقع الارتباط لنصف جزيئات GTPase - بتركيز أقل نسبيا من البروتين A ، مما يشير إلى التقارب الأكبر للبروتين B ل G
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية