مقايسة المصفوفة الدقيقة للمستضد الفيروسي للكشف عن الأنماط التماثلية للأجسام المضادة في المصل ضد المستضد الفيروسي

ابدأ مقايسة المصفوفة الدقيقة للمستضد الفيروسي بشريحة مصفوفة دقيقة للمستضد الفيروسي المحضرة.

تحتوي الشريحة على وسادات متعددة ، لكل منها مجموعة واحدة تحتوي على مئات المستضدات المنقاة من سلالات فيروسية متعددة مطبوعة على بقع مرتبة في شبكة. تحتوي كل بقعة على نوع مستضد واحد ممتص على سطح النيتروسليلوز الصغير ثلاثي الأبعاد.

قم بتثبيت الشريحة في غرفة لسهولة التعامل معها أثناء الخطوات اللاحقة. أضف حاجزا حاجب يحتوي على بروتينات ترتبط بالأسطح المتبقية للشريحة لمنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة بالسطح.

احتضان شريحة المصفوفة الدقيقة بمصل بشري مخفف. تتعرف الأنماط التماثلية للأجسام المضادة في المصل ، الخاصة بالمستضدات الموجودة على الشريحة ، على حواتم المستضدات وترتبط بها.

قم بإزالة المصل. يغسل بمخزن مؤقت لإزالة الأجسام المضادة والبروتينات غير المرتبطة على الشريحة.

أضف مخاليط الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالنقاط الكمومية ، ولكل منها نقطة كمومية مختلفة. ترتبط الأجسام المضادة الثانوية الخاصة بالنمط المتماثل على وجه التحديد بالنمط الإسمالي للجسم المضاد للمصل المرتبط بالمستضدات الموجودة على الشريحة.

استخدم جهاز تصوير المصفوفة الدقيقة لتحديد ارتباط الجسم المضاد بالمستضدات داخل شريحة المصفوفة الدقيقة.

عند الإثارة بأطوال موجية مناسبة ، تعود النقاط الكمومية المرتبطة بالأجسام المضادة الثانوية إلى الحالة الأرضية وتصدر إشارات فلورية محددة يتم اكتشافها بواسطة الكاشف الضوئي.

شدة التألق الموضعي النمط الإسمالي للجسم المضاد للمصل داخل المصل المرتبط بالمستضد الفردي.

بعد برمجة برنامج الطباعة بالبروتوكول المطلوب ، ابدأ تشغيل الطباعة. عند الانتهاء ، ضع شرائح المصفوفة الدقيقة غير المفكشة في صندوق مقاوم للضوء في خزانة مجففة في درجة حرارة الغرفة.

لاستكشاف المصل بحثا عن الأجسام المضادة على المصفوفة الدقيقة ، استخدم المشابك لإرفاق جانب وسادة شرائح المصفوفة الدقيقة لأعلى على غرف الفحص ، ووضع الغرف في الإطارات.

كن حذرا عند تجميع الشرائح ، حيث يمكن كسرها بسهولة ، وتحقق من عدم وجود أي تسرب بعد الجفاف. إذا لزم الأمر ، قم بتفكيك الشرائح وإعادة تجميعها لإصلاح التسريبات.

أعد ترطيب الشرائح ب 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت المانع المصفى لكل بئر ، وقم بتخفيف المصل بنسبة 1 إلى 100 في 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للحجب لكل عينة. بعد ذلك ، قم باحتضان شرائح المصفوفة الدقيقة المعاد ترطيبها والأمصال المخففة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة و 100 إلى 250 دورة في الدقيقة على شاكر مداري.

في نهاية الحضانة، استخدم أطراف الماصة المتصلة بخط تفريغ مع قارورة تجميع ثانوية لشفط المخزن المؤقت للحجب بعناية من زاوية كل حجرة دون لمس الضمادات، وأضف المصل المخفف على الفور إلى الوسادات دون السماح للوسادات بالجفاف. بعد ذلك ، ضع الإطارات المغطاة في صواني تحتوي على مناشف ورقية مبللة محكمة الغلق للحفاظ على الرطوبة ، واحتضن الإطارات طوال الليل عند 4 درجات مئوية على شاكر هزاز.

لوضع العلامات على الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بالنقطة الكمومية ، قم بشفط المصل بعناية ، كما هو موضح للتو ، واشطف الشرائح بثلاث غسلات في 100 ميكرولتر من محلول T-TBS الطازج لكل بئر لمدة 5 دقائق لكل منهما على شاكر مداري. ثم يتم احتضان الشرائح بمزيج من الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع النقطة الكمومية ، ثم تغسل ثلاث مرات كما هو موضح في البروتوكول باستخدام نفس التقنية كما هو موضح للتو.

بعد الغسيل الأخير ، قم بإزالة الشرائح بعناية من الغرف ، واشطف الشرائح برفق بالماء المقطر المزدوج المصفى ، ثم ضع كل شريحة في أنبوب سعة 50 مل. ثم جفف الشرائح عن طريق الطرد المركزي.

للحصول على صور لشرائح المصفوفات المصغرة، قم أولا بتشغيل جهاز التصوير المحمول، ثم ضع الشريحة المراد تصويرها بعناية ووجهها لأسفل في حامل الشريحة في غرفة التصوير. افتح برنامج التصوير ، وضمن علامة التبويب "تكوين التصوير" ، حدد تكوين الشريحة المناسب.

ضمن علامة التبويب "التحكم في الصورة" ، حدد قناة الفلورسنت المناسبة ، واضبط أوقات التعريض والاكتساب ، اعتمادا على تفاعل المصل. ثم انقر فوق "التقاط" لبدء الحصول على الصورة. في نهاية الاستحواذ ، استخدم الشبكات الموجهة على العلامات الإيمانية لاكتشاف بقع المصفوفة.