الفحص المجهري TIRF لتصور ديناميكيات اقتران الأكتين والأنابيب الدقيقة
موسوعة JoVE للتجارب
التقنيات البيولوجية
0 مشاهدة • 7:27 دقيقة • July 8th, 2025
تتبلمر مونومرات الأكتين بطريقة من الرأس إلى الذيل لتشكيل ألياف رقيقة تسمى الخيوط الدقيقة. وبالمثل ، تتبلمر ثنائيات التوبولين إلى أنابيب دقيقة أسطوانية مجوفة أطول. تحافظ مكونات الهيكل الخلوي هذه على شكل الخلية وتسهل الحركة الخلوية.
لتصور ديناميكيات اقتران الأكتين والأنابيب الدقيقة عن طريق الفحص المجهري للانعكاس الداخلي الكلي ، TIRF ، خذ مجموعة تصوير مخصصة.
تتكون مجموعة التصوير من غطاءين: غطاء علوي مطلي بالسيلان m-PEG وغطاء سفلي مطلي بالسيلان البيوتين-PEG. يتم تباعد الغطاءين طوليا بشريط لاصق على الوجهين ومختومان من كلا الطرفين لإنشاء قناة تدفق.
الماصة BSA في قناة التدفق لتجهيز الغرفة. أضف محلول الستربتافيدين واحتضانه. ترتبط جزيئات الستربتافيدين بجزيئات البيوتين المتصلة ب PEG-silane الخاص بالغطاء السفلي.
تدفق المخزن المؤقت TIRF إلى القناة. أضف محلول مزيج الهيكل الخلوي الذي يحتوي على ثنائيات توبولين غير مصنفة وخضراء تحمل علامة الفلوروفور ، جنبا إلى جنب مع مونومرات الأكتين غير المسمى والمسمى بالبيوتين والأرجواني الموسوم بالفلوروفور.
بعد ذلك ، أضف محلول تفاعل يحتوي على ATP - عامل تعزيز بلمرة الأكتين ، و GTP - عامل تعزيز بلمرة التوبولين ، وبروتين اقتران الأكتين والأنابيب الدقيقة. حضن.
ترتبط ثنائيات التوبولين بجزيئات GTP وتبلمر ، بينما ترتبط مونومرات الأكتين بجزيئات ATP وتبلمر لتكوين أنابي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية