القياس الكمي لتكوين الكشكشة الغشائية باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح

تعمل المحفزات الخارجية على تنشيط الخلايا وتحفز نتوء الغشاء الدائري ثلاثي الأبعاد ، أو تكوين كشكشة الغشاء ، وهو أمر ضروري للأنشطة الخلوية المختلفة.

لتصور تكوين كشكشة الغشاء ، ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على غطاء في القاعدة. يحتوي الجزء العلوي من الغطاء على ضامة مستزرعة.

عالج هذه البلاعم بجزيئات المحفزة التي تنشط الخلايا ، مما يسهل إعادة تنظيم الهيكل الخلوي وتكوين نتوء الغشاء. تراكب الخلايا بمحلول مثبت ، وربط البروتينات ، والحفاظ على البنية الخلوية.

عالج الضامة الثابتة بتركيزات متزايدة من الكحول للجفاف الكامل. جفف هذه البلاعم باستخدام مجفف نقطة حرجة ، والقضاء على أي آثار للماء لتحسين التصوير.

قم بتركيب الغطاء على حامل عينة مجهر إلكتروني ماسح ، أو SEM ، باستخدام شريط موصل. قم بتغطية الغطاء المحتوي على البلاعم بطبقة معدنية رقيقة ، مما يضمن الموصلية الإلكترونية الجيدة أثناء التصوير.

ضع الغطاء في غرفة SEM. ركز شعاع الإلكترون على الغطاء. يصطدم شعاع الإلكترون بغشاء البلاعم المطلي بالمعدن ، مما يتسبب في توليد إلكترون ثانوي منخفض الطاقة من سطح الغشاء.

تعمل النتوءات ثلاثية الأبعاد على تشتيت الإلكترونات بشكل مختلف عن بقية الغشاء ، مما يبرز هذه الميزات على سطح الخلية. يجمع الكاشف الإلكترونات المتناثرة من مناطق سطح الخلية المختلفة ، مما يولد صورة تباين.

في صورة SEM ، تظهر البلاعم أغمق مع نتوء