الفحص المجهري المناعي الفلوري لتحليل فواصل الحمض النووي المزدوجة

لتصور بروتينات استجابة لتلف الحمض النووي المحددة عند كسر الحمض النووي المزدوج ، DSB ، المواقع التي تستخدم المجهر المناعي ، تبدأ بشرائح مجهرية تحتوي على طبقات أحادية للخلية البشرية أحادية النواة مع DSBs. إصلاح الخلايا مع بارافورمالدهايد.

عالج بمنظف غير أيوني ، وأغشية نفاذية للوصول إلى الأهداف داخل الخلايا. أضف محلول حجب يحتوي على البروتين ، مما يحجب مواقع الارتباط غير المحددة للخلايا. احتضان الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط ببروتينات الاستجابة المستهدفة.

عالج بخليط من الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفورات المختلفة للارتباط على وجه التحديد بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتينات. صبغة الحمض النووي باستخدام DAPI. إضافة وسيط التركيب ؛ قم بتركيب الغطاء.

أثناء الفحص المجهري الفلوري ، يصل شعاع الضوء الساقط إلى مرشح الإثارة مما يسمح بمرور ضوء بطول موجة إثارة معين. عند الوصول إلى المرآة ثنائية اللون - مقسم الشعاع - ينعكس ضوء الإثارة بشكل انتقائي نحو العدسة الشيئية ، والتي تركز الضوء على العينة.

يثير ضوء الإثارة الساقط إلكترونات الفلوروفور إلى حالة طاقة أعلى. عند العودة إلى الحالة الأرضية ، تنبعث الإلكترونات من الضوء بطول موجي أطول ، يتم جمعها بواسطة العدسة الموضوعية ، وتعود إلى المرآة ثنائية اللون.

تسمح المرآة لضوء التألق المنبعث بالمرور عبر مرشح الانبعاث ، مما يسمح فقط لض