Name: PCR الأمثل القائم على الكشف عن المفطورة (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: تعلم استخدام مجموعة الكشف عن المفطورة بالPCR المحسّنة لاكتشاف تلوث مزارع الخلايا. تتضمن الطريقة تحضير العينات والتضخيم الحراري وتحليل النتائج بالهجرة الكهربائية لضمان سلامة المزارع الخلوية.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

بتمويل من سيغما الدريخ

1. ميكوبلازما كشفها <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن اختبار supernatants ثقافة الخلية مباشرة أو نموذج يمكن إعدادها للاستخدام في وقت لاحق. للتحضير لاستخدامها لاحقا مكان 100 ميكرولتر من طاف في أنبوب التضخيم معقمة واحتضان درجة مئوية لمدة 5 دقائق. في 95 بمجرد اكتمال هذه يمكن تخزينها في العينة 2-8 درجة مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد. فقط قبل إلى تشغيل أجهزة الطرد المركزي لفترة وجيزة العينة (5 ثوان) لتكوير اي حطام الخلوية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحضير عينات لPCR ، وتحديد الحجم الكلي للطق في Jumpstart العازلة بوليميريز / الإماهة الحمض النووي المطلوبة لردود الفعل. سنكون إعداد 5 ردود الفعل الكلي. وسوف تتطلب ردود فعل 2.5μl خمسة من طق و114.5μl العازلة من الجفاف. هذا وسوف تحتوي على الحد الأدنى من وحدة واحدة من طق في رد الفعل و22.5μl العازلة من الجفاف في رد الفعل السلبي والتحكم العينة زائد 24.5μl من الإماهة العازلة لمراقبة إيجابية. وينبغي أن يضاف 1 وحدة من بوليميريز الحمض النووي في رد فعل على حجم مناسب لتعويض السوائل العازلة. وهذا يختلف مع طق المستخدمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان حجم المحسوبة بوليميريز الحمض النووي في أنبوب طق microcentrifuge نظيفة واتبع مع حجم المحسوبة العازلة الإماهة. وينبغي أن تكون مختلطة الحمض النووي بوليميريز / الإماهة العازلة بلطف عبها الأنبوب. لا ينبغي أن يكون هذا الخليط vortexed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحضير عينات الرقابة السلبية واستخدام أنابيب شفافة المنصوص عليها في رد فعل عدة. الأنابيب تفاعل المنصوص عليها في عدة تحتوي بالفعل nuclueotides والشعائل والداخلية DNA السيطرة. يجب وضع 23 ميكرولتر من مزيج Jumpstart من الحمض النووي طق العازلة البلمرة / الإمهاء ، الذي أعد في الخطوات السابقة ، في كل من السيطرة السلبية وأنابيب العينات. إضافة 2 ميكرولتر من المياه مجانا الحمض النووي لرقابة السلبية وإضافة 2 ميكرولتر من العينة إلى كل من أنابيب العينات والتسمية. خلط محتويات عبها بواسطة الأنابيب. لا ينبغي أن تكون محتويات vortexed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لإعداد مراقبة إيجابية استخدام أنابيب رد فعل الوردي المقدمة في المجموعة. الأنابيب تفاعل المنصوص عليها في عدة تحتوي بالفعل nuclueotides والشعائل والداخلية DNA السيطرة. إضافة 25 ميكرولتر من مزيج Jumpstart من الحمض النووي بوليميريز طق العازلة / الإمهاء ، الذي أعد في الخطوات السابقة ، للأنابيب التفاعل والتسمية. خلط محتويات عبها بواسطة الأنابيب. لا ينبغي أن تكون محتويات vortexed. احتضان سيطرة سلبية ، والسيطرة الإيجابية وأنابيب العينات في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لPCR أن تجرى على العينات يجب أن توضع في cycler الحرارية. عند استخدام برنامج Jumpstart طق غير مطلوب خطوة التنشيط. وضع أنابيب رد الفعل في cycler الحرارية. يجب تعيين دورات على النحو التالي : 94 درجة مئوية لمدة 30 ثانية و 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية و 72 درجة مئوية لمدة 40 ثانية. وسيتم تشغيل هذه الدورات 40 مرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب مرة واحدة في دورات PCR تكون قد أكملت تبريد عينات الى 4-8 درجة مئوية بحلول حرمانهم من cycler الحراري ووضعها في الجليد. وينبغي عند عينات فترت يكون تحميلها agarose هلام للالكهربائي. تحميل الجل وصبغ ليست ضرورية لأنها موجودة بالفعل في أنابيب التفاعل. 8 تحميل مباشرة لكل ميكرولتر PCR في ممر منفصل. وقف الكهربائي بعد هجرة 2،5-3،0 سم. </li></ol> 2. ممثل النتائج ينبغي للسيطرة سلبية تظهر الفرقة في حوالي 481 سنة مضت. ويمكن ملاحظة ذلك في العمود تحكم سلبي على هلام الكهربائي الذي يظهر في بداية الفيديو. غياب الرقابة السلبية في الفرقة 481 سنة مضت ، هي مؤشر جيد على أن نشاط بوليميريز لم sufficienttaq المستخدمة لم تكن حساسة بما فيه الكفاية. سوف تظهر عينات إيجابية ميكوبلازما العصابات في مجموعة من 270 ± 8 الغليان. وسوف يكون ثقيلا الفرقة لعينات ملوثة للغاية وخافت لعينات ملوثة طفيفة. ويمكن النظر إلى الاختلافات في كثافة في الأعمدة نموذج ايجابي على هلام الكهربائي الذي يظهر في بداية الفيديو. جميع العينات تحتوي على الرقابة الداخلية السلبية لإثبات أن PCR حدث كما هو متوقع. فمن الطبيعي أن نرى غياب الرقابة الداخلية على عينات ملوثة للغاية. إذا لم يكن هناك عصابة في النطاق الإيجابي أو الفرقة في النطاق السلبي على عينتك هذا يعد مؤشرا جيدا أن تحول دون العينات الخاصة بك. يمكن إذا ما يحول دون تكون العينة إزالة مثبطات PCR عن طريق إجراء استخراج الحمض النووي. <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3057/3057fig1.jpg"> وتظهر نتائج الكشف عن ميكوبلازما بواسطة PCR : الشكل 1 Amplicon العصابات ذات الصلة. 2 لين هو السيطرة السلبية ، التي ينبغي أن تظهر الفرقة في حوالي 481 سنة مضت. غياب الرقابة السلبية في الفرقة 481 سنة مضت ، هي مؤشر جيد على أن تستخدم طق لم تكن حساسة بما فيه الكفاية. سوف ميكوبلازما عينات إيجابية تظهر عصابات في نطاق 270 + 8 الغليان كما هو مبين في الممرات 3-6. وسوف تكون الفرقة هيئة التعليم العاليVY لعينات ملوثة للغاية (حارة 6) ، وخافت لعينات ملوثة طفيفة (حارة 4). جميع العينات تحتوي على الرقابة الداخلية السلبية (481 بي بي) لإثبات أن PCR حدث كما هو متوقع. فمن الطبيعي أن نرى غياب الرقابة الداخلية على عينات ملوثة للغاية.

<ol><li>Wirth, M., Hauser, H., Drexler, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+Sensitivity+of+Polymerase+Chain+Reaction+%28PCR%29+in+Comparison+with+Other+Methods+for+the+Detection+of+Mycoplasma+Contamination+in+Cell+Lines%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Specificity and Sensitivity of Polymerase Chain Reaction (PCR) in Comparison with Other Methods for the Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Lines.</a> Journal of Immunological Methods. 164, 91-100 (1993).</li>
<li>Kong, H., Volokhov, D. V., George, J., Ikonomi, P., Chandler, D., Anderson, C., Chizhikov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amplification+of+Cell+Culture+Enrichment+for+Improving+the+Sensitivity+of+Mycoplasma+Detection+Methods+Based+on+Nucleic+Acid+Amplification+Technology+%28NAT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Microbiology+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Amplification of Cell Culture Enrichment for Improving the Sensitivity of Mycoplasma Detection Methods Based on Nucleic Acid Amplification Technology (NAT).</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 77, 223-232 (2007).</li>
<li>Volokhov, D. V., Graham, L. J., Borson, K. A., Chizhikov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mycoplasma+Testing+of+Cell+Substrates+and+Biologics%3A+Review+of+Alternative+Non-Microbiological+Techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Probes%22%5BJournal%5D)">Mycoplasma Testing of Cell Substrates and Biologics: Review of Alternative Non-Microbiological Techniques.</a> Molecular and Cellular Probes. , (2011).</li>
</ol>

المؤلفون هم موظفون من سيغما الدريخ التي أنتجت الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة.

وبسبب الحساسية المفرطة من المجموعة ، وعندما يقوم بشكل صحيح يجب أن تسفر عن نتائج محددة عدة تشير إلى أم لا فقد عينتك ميكوبلازما التلوث. وقد الأمثل للاستخدام مع طقم البلمرة Jumpstart من الحمض النووي طق. ويمكن استخدام taqs الأخرى عند إعداد العينات ولكن الرقابة الداخلية في الفرقة 481 الغليان يجب أن تكون موجودة تشير إلى حساسية السليم للطق البديلة. فمن الممكن لنطاقات ايجابية لمعرض كثافات مختلفة تبعا لمستوى التلوث. فمن الممكن أن نلاحظ غياب الفرقة الرقابة الداخلية على عينات ملوثة بشدة. الحذر واستخدام الأسلوب السليم عند إعداد عينات لمنع التلوث وحاسمة لالمناسبة. كشف عند استخدام الكشف بالمرصاد PCR المفطورة كيت.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> بالمرصاد كشف PCR المفطورة كيت </td><td> سيغما الدريخ </td><td> MP0035 </td><td> </td></tr><tr><td> Jumpstart من البلمرة طق الحمض النووي </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D9307 </td><td> </td></tr><tr><td> GenElute الحمض النووي الجينوم الدم طقم </td><td> سيغما الدريخ </td><td> MP0030 </td><td> </td></tr><tr><td> أنابيب التضخيم نونك </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T0447 </td><td> </td></tr></tbody></table>

pcr الأمثل القائم على الكشف عن المفطورة

Optimized PCR-based Detection of Mycoplasma

صيانة خطوط الخلية خالية من التلوث أمر أساسي لخلية القاعدة البحثية. من بين المخاوف أكبر ملوث وتلوث ميكوبلازما. تباطأ انتشار الأسلحة النووية وعلى الرغم من الانحرافات الكروموسومية ميكوبلازما لا تقتل الخلايا الملوثة عادة ، هم من الصعب كشف ويمكن أن تسبب مجموعة متنوعة من الآثار على الخلايا المستزرعة ، بما في ذلك عملية الأيض تتغير. باختصار ، وتلوث ميكوبلازما التنازلات قيمة هذه خطوط الخلايا في توفير البيانات الدقيقة للبحوث علوم الحياة. مصادر التلوث الميكوبلازما في المختبر هي صعبة للغاية للسيطرة تماما. كما تم العثور على أنواع معينة ميكوبلازما على جلد الإنسان ، ويمكن من خلال تقنية تعرفوا العقيم الفقراء. بالإضافة إلى ذلك ، فإنها يمكن أن تأتي من مكملات الملوثة مثل مصل بقري جنيني ، والأهم من غيرها من الثقافات الخلية الملوثة. مرة واحدة ميكوبلازما يلوث ثقافة ، فإنه يمكن أن تنتشر بسرعة لتلويث مناطق أخرى من المختبر. الالتزام الصارم الممارسات المختبرية الجيدة ، مثل تقنية العقيم الجيدة هي المفتاح ، وينصح بشدة الفحص الروتيني للميكوبلازما للنجاح في مراقبة التلوث ميكوبلازما. أصبح PCR المستندة الكشف عن الميكوبلازما وسيلة شعبية جدا لصيانة روتينية خلية الخط. طرق الكشف PCR المستندة حساسة للغاية ويمكن أن تقدم نتائج سريعة ، والذي يسمح للباحثين على الاستجابة بسرعة للقضاء على التلوث وعزل حال اكتشافه بالمقارنة مع الوقت المطلوب باستخدام التقنيات الميكروبيولوجية. الكشف عن بالمرصاد PCR المفطورة كيت حساس للغاية ، مع حد الكشف عن الجينوم سوى 2 في ميكرولتر. الاستفادة من البلمرة Jumpstart من الحمض النووي طق محددة للغاية والتصميم التمهيدي الملكية ، وتقلص إلى حد كبير ايجابيات كاذبة. ومريحة 8 أنبوب تنسيق ، والشرائط قبل المغلفة مع dNTPs والاشعال المرتبطة يساعد على زيادة الإنتاجية لتلبية احتياجات العملاء بشكل اكبر مع مجموعات من خطوط الخلايا. نظرا للحساسية البالغة للمجموعة ، يجب توخي الحذر الشديد لمنع التلوث غير المتعمدة من العينات والكواشف. البروتوكول خطوة بخطوة نظهر يسلط الضوء على الممارسات والاحتياطات اللازمة للكشف عن ميكوبلازما موثوق بها. نحن أيضا إظهار ومناقشة نتائج نموذجية وتفسيرها. هدفنا هو التأكد من نجاح الباحثين باستخدام الكشف بالمرصاد PCR المفطورة كيت.

الكشف عن بالمرصاد PCR المفطورة كيت يستخدم تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) ، التي أنشئت بوصفها الأسلوب المفضل لأعلى حساسية في الكشف عن التلوث المفطورة ، Acholeplasma والميورة في الثقافات الأخرى وخلية خلية ثقافة تستمد البيولوجية.

PCR الأمثل القائم على الكشف عن المفطورة

يُعد الحفاظ على خطوط خلوية خالية من التلوث أمراً ضرورياً في الأبحاث القائمة على الخلايا. ومن بين أكبر المخاوف المتعلقة بالتلوث يأتي التلوث بالمايكوبلازما (mycoplasma)....

الهدف العام من هذا الإجراء هو التوضيح المرئي لخطوات استخدام طقم الكشف عن المايكوبلازما بتقنية PCR من نوع lookout والمحسّن للكشف عن تلوث المايكوبلازما. يتم تحقيق ذلك أولاً عن طريق تسخين العينات إلى 95 °C لتعطيل أي جزيئات DNA قد تجعل القالب المطلوب غير مناسب لعملية PCR. بعد ذلك، يتم تحضير العينات لعملية PCR باستخدام الأنابيب المرفقة والمشفرة مسبقاً بالنيوكليوتيدات، والبادئات (primers)، وDNA للتحكم الداخلي.تتمثل الخطوة الثالثة من الإجراء في التدوير الحراري تحت ظروف تم تحسينها بعناية لتحقيق أقصى درجة من الحساسية والقضاء على التضخيم غير النوعي. وفي النهاية، يمكن الحصول على نتائج لتحديد ما إذا كانت العينات المعنية ملوثة بالميكوبلازما (mycoplasma) من خلال التقييم باستخدام الفصل الكهربائي لهلام الأجاروز. وتكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية مقارنة بالطرق الحالية في أن الكواشف تكون جاهزة مسبقاً وفي أنابيب PCR عالية الجودة.وهذا يجعل العملية أكثر ملاءمة وكفاءة. وميزة أخرى لهذه المجموعة هي أنها تتطلب أقل من جينومين من الميكوبلازما لكل µL من العينة للكشف عن التلوث. عند تنفيذ إجراء الكشف عن الميكوبلازما، من المهم تجنب أي تلوث محتمل من خلال ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة لتقليل تعرض الجلد إلى أدنى حد، والتأكد من أن جميع الكواشف المستخدمة خالية من التلوث، والحفاظ على تقنية تعقيم مناسبة في جميع الأوقات.يمكن إجراء العملية إما مباشرة على طافيات المزارع الخلوية، أو يمكن تحضير العينات لاستخدامها في تاريخ لاحق. ولتحضير العينات للاستخدام اللاحق، يتم وضع 100 µL من كل طافية في أنبوب تضخيم معقم وتحضينها عند 95 °C لمدة خمس دقائق. وبعد التحضين، يمكن تخزين العينات في درجة حرارة تتراوح من 2 إلى 8 °C لمدة تصل إلى أسبوع واحد.قبل اختبار العينات مباشرة، قم بإجراء عملية طرد مركزي قصيرة لترسيب أي بقايا خلوية. ولتحضير العينات لجهاز PCR أولاً، حدد الحجم الإجمالي لمنظم إعادة تمييه DNA polymerase المطلوب للتفاعلات. يجب إضافة وحدة واحدة من DNA polymerase لكل تفاعل إلى الحجم المناسب من منظم إعادة التمييه، والذي سيختلف باختلاف tac المستخدم في هذا العرض التوضيحي؛ سيتم استخدام jumpstart TAC D 93 0 7 في خمسة تفاعلات، وهي ثلاث عينات بالإضافة إلى ضابط إيجابي واحد وضابط سلبي واحد.ضع الحجم المحسوب من DNA polymerase في أنبوب طرد مركزي دقيق نظيف، ثم أضف إليه الحجم المحسوب من محلول إعادة التميؤ (rehydration buffer). اخلط DNA polymerase ومحلول إعادة التميؤ بلطف عن طريق نقر الأنبوب. لا تستخدم جهاز الخلط الدوامي (vortex) لهذا الخليط.استخدم أنابيب التفاعل الشفافة المرفقة في الطقم لتحضير العينة والضابط السلبي. تحتوي أنابيب التفاعل هذه بالفعل على النيوكليوتيدات والبادئات والحمض النووي للضابط الداخلي؛ لذا قم بنقل 23 µL من محلول إعادة ترطيب DNA polymerase الذي تم تحضيره مسبقاً باستخدام الماصة. اخلط المحتويات في كل من أنابيب العينات وأنابيب الضابط السلبي.بعد ذلك، أضف 2 µL من الماء الخالي من DNA إلى العينة الضابطة السالبة و2 µL من كل عينة إلى أنابيب العينات المخصصة لها. امزج المحتويات عن طريق نقر الأنابيب خفيفاً، مع مراعاة عدم استخدام جهاز الرج المداري (vortex) للمحتويات.لتحضير الضابط الموجب، استخدم أنابيب التفاعل الوردية المرفقة في الطقم. تحتوي أنابيب التفاعل هذه بالفعل على النيوكليوتيدات والبادئات والحمض النووي للضابط الداخلي؛ أضف 25 µL من خليط منظم إعادة إماهة DNA polymerase إلى أنبوب التفاعل. اخلط المحتويات عن طريق نقر الأنبوب، ويجب عدم استخدام جهاز مزج العينات (vortex) للمحتويات.بعد ذلك، تُحضن أنابيب الضابط الموجب، والضابط السالب، وأنابيب العينة في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. وبعد مرور خمس دقائق، تُنقل جميع أنابيب التفاعل إلى جهاز التدوير الحراري. وبالنسبة لتفاعل PCR، تُضبط الظروف التالية لـ 40 دورة.درجة حرارة 94 °C لمدة 30 ثانية. درجة حرارة 55 °C لمدة 30 ثانية ودرجة حرارة 72 °C لمدة 40 ثانية. لا يلزم إجراء خطوة التنشيط عند استخدام Jumpstart tack.بمجرد اكتمال دورات PCR، أخرج العينات من جهاز التدوير الحراري وضعها على الثلج لتبرد حتى تصل درجة حرارتها إلى 4 إلى 8 درجة مئوية. يمكن بعد ذلك تحميل العينات على هلام أغروز لإجراء الفصل الكهربائي؛ قم بتحميل 8 µL مباشرة من كل تفاعل PCR في مسار منفصل. لا داعي لإضافة محلول التحميل والصبغة قبل تحميل العينات لأنها مدرجة بالفعل في أنابيب التفاعل.أوقف عملية الرحلان الكهربائي بعد أن يهاجر صبغ التتبع لمسافة تتراوح بين 2.5 إلى ثلاثة سنتيمترات. تظهر النتائج التمثيلية للكشف عن الميكوبلازما بواسطة PCR في هذه الصورة لمسار هلام الأجاروز. يمثل المسار اثنان الضابط السلبي، والذي يجب أن يظهر حزمة عند حوالي 481 base pairs.يعد غياب حزمة الضابط السلبي عند 481 زوجاً قاعدياً مؤشراً جيداً على أن تقنية TAC المستخدمة لم تكن حساسة بما يكفي. ستظهر العينات الإيجابية لـ Mycoplasma حزمات في نطاق 270 زائد أو ناقص ثمانية أزواج قاعدية كما هو موضح في المسارات من ثلاثة إلى ستة. ستكون الحزمة كثيفة في العينات شديدة التلوث وباهتة في العينات قليلة التلوث.تحتوي جميع العينات على ضابط داخلي سلبي لإثبات أن تفاعل PCR قد تم كما هو متوقع. ومن الطبيعي ملاحظة غياب الضابط الداخلي في العينات شديدة التلوث. ويعد غياب الحزمة في كل من النطاقين الموجب والسالب، كما هو موضح في الممر السابع، مؤشراً جيداً على وجود تثبيط في العينات.في حال تثبيط العينة، يمكن إزالة مثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عن طريق إجراء استخلاص للحمض النووي (DNA). بعد مشاهدة هذا الفيديو، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنفيذ جميع الخطوات الضرورية الموضحة في إجراءات المجموعة، بالإضافة إلى كيفية تفسير النتائج واستكشاف الأخطاء وإصلاحها عند الضرورة.

optimized-pcr-based-detection-of-mycoplasma

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

تصميم خطة واضحة سير العمل ليوم واحد لتشخيص مسببات الأمراض البكتيرية تمكن من التعرف السريع للالتهابات مجرى الدم. إدراج الأهداف الثمانية البكتيرية ذات الصلة سريريا وملفاتهم الشخصية المقاومة للمضادات الحيوية يقدم الطبيب نظرة أولية في نفس اليوم، والتي يمكن أن تؤدي إلى مزيد من العلاج الملائم.

في يوم واحد خطة سير العمل للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية ومضادات الميكروبات اختبار المقاومة من زرع الدم

نحن تصف طريقة متعددة للكشف عن الكائنات الدقيقة ضمن عينة باستخدام الخرز ، بالإضافة الفلورسنت قليل النوكليوتيد. غير المهجنة Amplicon من جميع الكائنات الحية داخل عينة على لجنة التحقيق ، إلى جانب الخرز. وتستخدم أداة أو Luminex بيو الصفيف إلى الاستعلام كل حبة حبة لنوع وإشارة التهجين.

كشف متعددة من البكتيريا الموجودة في مجمع العينات السريرية والبيئية باستخدام قليل النوكليوتيد ، بالإضافة نيون المجهرية

وقد تم تطوير فحص للكشف عن QPCR كولاي O157: H7 استهداف علامة جينية فريدة، Z3276. تم الجمع بين QPCR مع propidium monoazide (سلطة النقد الفلسطينية) العلاج للكشف عن الخلية الحية. تم تعديل هذا البروتوكول وتتكيف مع شكل لوحة 96 جيدا لسهولة ومتسقة التعامل مع عينات عديدة...

الكشف عن لايف<em&gt; كولاي</em&gt; O157: H7 من قبل خلايا PMA-QPCR

يوصف الإنتاجية العالية اختبار الحمض النووي والحمض النووي الريبي مسببات الأمراض استنادا كتبها النانو PCR باستخدام الكلاب المتلازمة والفروسية لوحة PCR في الجهاز التنفسي.

كشف الإنتاجية العالية للجهاز التنفسي مسببات الأمراض في العينات الحيوانية التي كتبها النانو PCR

نقدم هنا، بروتوكولا لدقة تحديد مقدار التعديلات الوراثية متعددة من المنطقة المستهدفة في رد فعل واحد استخدام دبكر الإنزال وزوج فريدة من المسابر التحلل المائي.

قطره واحدة رقمي البلمرة المتسلسل لكشف شامل ومتزامن من الطفرات في المناطق الساخنة

قمنا بتطوير طريقة للكشف عن Phytophthora capsici zoospores في مصادر المياه باستخدام طريقة استخراج الحمض النووي ورقة مرشح إلى جانب تضخيم متساوي الحراري حلقة بوساطة (مصباح) التي يمكن تحليلها في الميدان أو في المختبر.

الكشف عن فيتفتورا capsici في مياه الري باستخدام Loop-بوساطة التضخيم متساوي الحرارة

في عدوى الميكوبلازما الرئوية ، يمكن أن تؤدي اختبارات الأمصال إلى نتائج جيدة ، ولكن مع خصوصية منخفضة بسبب التفاعل المتقاطع المناعي. يضمن ELISA الذي يلتقط المستضد الداخلي ، الموصوف في هذه الورقة ، خصوصية عالية للأنواع وقد ثبت أنه اختبار فحص موثوق به للتشخيص الدقيق للمتفطرة الرئوية.

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بإنزيم التقاط المستضد للكشف المحدد عن الميكوبلازما الرئوية

يمكن أن تسبب مسببات الأمراض البكتيرية المختلفة التهابات الجهاز التنفسي وتؤدي إلى مشاكل صحية خطيرة إذا لم يتم اكتشافها بدقة وعلاجها على الفور. يوفر الكشف السريع والدقيق عن هذه العوامل الممرضة عن طريق التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة إدارة فعالة ومكافحة التهابات الجهاز التنفسي في البيئات السريرية.

الكشف السريع عن مسببات الأمراض البكتيرية التي تسبب التهابات الجهاز التنفسي السفلي عن طريق التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة القائمة على رقائق الموائع الدقيقة

هذا الفيديو يوضح بروتوكول لفحص الأوعية الدموية في المختبر الذي يلخص مراحل عديدة من الأوعية الدموية. وتظهر -- الوقت الفاصل بين الصور التي تنتشر من وتشكيل التجويف ، والمتفرعة مفاغرة -- الملامح الرئيسية الأوعية الدموية.

الفحص الأمثل الفايبرين الخرزة جل لدراسة الأوعية الدموية

Ubiquitination هو تعديل مفتاح posttranslational التي قامت بها مجموعة من ثلاثة الانزيمات. ترتبط طفرات في الجينات المسؤولة عن هذا التعديل مع العديد من الأمراض البشرية المختلفة. هنا ، نحن تصف بروتوكولات للكشف عن البروتين في الخلايا ubiquitination...

اكتشاف بروتين Ubiquitination

تعلم استخدام مجموعة الكشف عن المفطورة بالPCR المحسّنة لاكتشاف تلوث مزارع الخلايا. تتضمن الطريقة تحضير العينات والتضخيم الحراري وتحليل النتائج بالهجرة الكهربائية لضمان سلامة المزارع الخلوية.

PCR الأمثل القائم على الكشف عن المفطورة

استكشف المزيد من الفيديوهات