موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:37 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بفأر بالغ مقيد وقم بتعقيم بطنه. حقن مصدر حديد خارجي داخل الصفاق في أسفل اليمين البطن ، مما يمنع التلف العرضي للأعضاء المحيطة.
يدخل مصدر الحديد المحقون إلى الدورة الدموية الجهازية وينتقل إلى أعضاء مختلفة لتوفير الحديد الكافي لتكاثر المكورات السحائية.
ضع الفأر المخدر في وضع الانبطاح ، مع الحفاظ على عمود العمود الفقري مستقيما ، لتسهيل الوصول إلى صهريج ماجنا ، وهي منطقة معينة داخل السائل النخاعي ، ومساحة تحت العنكبوتية المملوءة بالسائل النخاعي بين الطبقات الوسطى والداخلية من السحايا المحيطة بالدماغ.
تعقيم رأس الفأر. حقن معلق من النيسرية السحائية أو المكورات السحائية ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض سالبة الجرام ، من خلال ثقب لدغ قذالي في صهريج ماغنا المملوء بالسائل الدماغي النخاعي.
في غضون ساعات من الحقن ، تتكاثر المكورات السحائية في السائل الدماغي النخاعي ، وتحتل المساحة تحت العنكبوتية ، التي تحتوي على آليات دفاع غير فعالة للمضيف.
تتفاعل البكتيريا مع الخلايا المبطنة لطبقات السحايا. يؤدي هذا التفاعل إلى استجابة التهابية. تطلق الخلايا السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، ويتم تجنيد الخلايا المناعية ، مما يؤدي إلى التهاب السحايا أو التهاب السحايا.
في النهاية ، قد تدخل المكورات السحائية أيضا الدورة الدموية الجهازية وتستعمر الأعضاء الأخرى.
قبل البدء في التجربة ، قم بوزن وتقييم درجة حرارة أجسامها. قم بتقطيع من الرقبة إلى أسفل ، وقم بتطهير البطن بنسبة 70٪ من الإيثانول. قبل حوالي ساعتين إلى ثلاث ساعات من الإصابة ، باستخدام إبرة قياس 25 ، حقن ديكستران الحديد داخل الصفاق في الربع الأيمن السفلي من البطن.
بعد تخدير ، تحقق من عمق التخدير عن طريق التأكد من عدم وجود استجابة للألم عند الضغط على إصبع القدم. بعد وضع الفأر في خزانة التدفق الصفحي ، ضعه في الاستلقاء القصي ، وقم بتمديد الأطراف بعناية في العمود الفقري العنقي للحفاظ على العمود الفقري في وضع مستقيم.
للحفاظ على تعليق بكتيري ثابت ، امزجه برفق قبل تحميله في حقنة بإبرة قياس 8 ملم و 30. تطهير الرأس بنسبة 70٪ من الإيثانول. ضع في الاستلقاء الجانبي ، وأبعد الأذنين عن الطريق ، وثني الرقبة باعتدال.
تأكد من أن خط الوسط للرقبة والرأس في وضع مواز تماما لسطح الطاولة. بعد ذلك ، المس أجنحة الأطلس وتأكد من تداخلها ، واشعر بالمسافة البادئة الطبيعية على خط الوسط ، حيث من المرجح أن تدخل الإبرة في الثقب القذالي.
املأ حقنة بإبرة قياس 8 ملم و 30 بجرعة بكتيرية شبه مميتة من المكورات السحائية أو مرق GC المكمل بالحديد ديكستران كعنصر تحكم في حجم إجمالي قدره 10 ميكرولترات. استخدم الإبرة لتحديد نقطة الحقن ، ثم قم بحقن محتوى المحقنة في صهريج الفئران من خلال ثقب لدغ قذالي.
تخلص من المحقنة والإبرة بأمان بعد الحقن. ضع في القفص تحت خزانة تدفق رقائقي. انتظر الاستيقاظ والتعافي الكامل للحركة وتابع بقاء على المصابة كما هو موضح في البروتوكول.