مراقبة ديناميكيات تجنيد العدلات والعبء البكتيري في موقع العدوى في نموذج الفئران

لمراقبة تجنيد العدلات - الخلايا المناعية الأساسية التي تسهل إزالة البكتيريا ، ابدأ بفأر مخدر ومعدل وراثيا ومنقوص المناعة مع جرح يعرض النسيج الضام على ظهره.

تعبر عدلات الفأر المعدلة وراثيا عن بروتين فلوري أخضر محسن ، مما يسهل تتبع العدلات. بالإضافة إلى ذلك ، فإن ضعف قدرتها على قتل البكتيريا يجعل الفأر أكثر عرضة للعدوى.

خذ لقاحا بكتيريا معدلا وراثيا يمتلك التلألؤ البيولوجي - خصائص انبعاث الضوء.

حقن اللقاح البكتيري في موقع الجرح، وضمان توصيله بين النسيج الضام واللفافة — طبقة نسيج ليفية أسفل النسيج الضام. في موقع الحقن ، تتكاثر البكتيريا وتستعمر ، مما يسبب عدوى الأنسجة.

استجابة للعدوى ، تطلق الخلايا المناعية الكيموكينات - جزيئات الإشارات الكيميائية التي تجذب العدلات. تهاجر العدلات بسرعة عن طريق الانجذاب الكيميائي - الحركة التي تسببها المواد الكيميائية ، وتتسرب عبر الأوعية الدموية إلى الأنسجة المجاورة للعدوى البكتيرية.

قم بتصوير الفأر بحثا عن إشارات التلألؤ الحيوي والفلورة ، والتي تمثل العبء البكتيري والعدلات المجندة ، على التوالي.

بمرور الوقت ، ترتبط الزيادة في إشارات التلألؤ البيولوجي والفلورة بزيادة العبء البكتيري وتجنيد العدلات المستمر في موقع العدوى.

لتلقيح المكورات العنقودية الذهبية ، املأ حقنة الأنسولين عيار 28 ب 50 ميكرولترا من اللقاح البكتيري المضيء بيولوجيا المحضر ، واستخدم إصبعا لسحب أدمة الجريح إلى الجانب. أمسك المحقنة بالتوازي تقريبا مع الأنسجة ، وأدخل المحقنة ببطء في الأنسجة حتى يشعر بانخفاض مفاجئ في المقاومة ، مما يشير إلى ثقب اللفافة.

مع وضع الإبرة في وسط الجرح ، قم بتسليم الحجم الكامل لللقاح ببطء. تأكد من أن اللقاح يشكل فقاعة في وسط الجرح بأقل قدر من التسرب أو التشتت ، وقم بإزالة المحقنة ببطء من. ثم أعد إلى قفصه بالحرارة والمراقبة حتى الشفاء التام.

بعد الجرح والعدوى ، ويوميا أثناء التجربة ، ضع الفأر المخدر في جهاز تصوير مضيء بيولوجيا ومضان مع الجرح مسطح قدر الإمكان. في برنامج التصوير، حدد اللمعان والتصوير الفوتوغرافي كأوضاع التصوير. يجب ضبط وقت التعريض الضوئي مسبقا على دقيقة واحدة عند التجميع الصغير، وF/stop 1 للتلألؤ، وF/stop 8 للتصوير الفوتوغرافي، وفتح لمرشح البث. ثم انقر فوق اكتساب لتسجيل الصورة.

بالنسبة للتصوير الفلوري في الجسم الحي، حدد Fluorescence وPhotograph (الصورة) كأوضاع تصوير. يجب ضبط وقت التعرض مسبقا على 1 ثانية عند التجميع الصغير ، و F / stop 1 للتألق ، و F / stop 8 للصور الفوتوغرافية ، والأطوال الموجية للإثارة والانبعاث 465 على 30 نانومتر و 520 على 20 نانومتر مع كثافة مصباح عالية على التوالي. ثم انقر فوق اكتساب لتسجيل الصورة.

بعد الحصول على كلتا المجموعتين من الصور ، أعد إلى قفصه مع المراقبة حتى الشفاء التام.

لتحليل الصور ، افتح الصورة المراد تحديدها كميا في برنامج مناسب لتحليل الصور ، وضع المنطقة الدائرية الافتراضية محل الاهتمام على منطقة الجرح بأكملها ، بما في ذلك الجلد المحيط. انقر فوق قياس منطقة الاهتمام، وسجل قيم متوسط التدفق للجرح للسماح برسم متوسط تدفق كل إشارة مقابل الوقت.

لقياس التئام الجرح ، قم بتركيب منطقة دائرية ذات أهمية على حافة الجرح وقم بقياس مساحة الجرح بالسنتيمتر المربع للسماح برسم التغيير الجزئي من خط الأساس مقابل الوقت.