ديناميكيات العضيات في الخلايا الليمفاوية البائية بعد التنشيط باستخدام حبيبات مغلفة بالمستضد

تربط مستقبلات الخلايا البائية ، BCRs ، على الخلايا الليمفاوية البائية ، المستضدات ، مما يتسبب في تنشيط الخلايا. يؤدي هذا إلى استيعاب المستضد للمعالجة في شظايا الببتيد ، والتي يتم تحميلها على جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية لعرضها على الخلايا الليمفاوية التائية المساعدة لتوليد استجابة مناعية فعالة.

لدراسة تنشيط الخلايا الليمفاوية البائية في المختبر باستخدام حبات مغلفة بالمستضد ، أولا ، احصل على حبات مغلفة بالمستضد. هذه الخرزات مغلفة تساهميا بالمستضدات ، والروابط الخاصة ب BCRs. يمنع البروتين غير التفاعلي مواقع الخرزة غير المرتبطة ، مما يمنع ارتباط الخلايا الليمفاوية البائية غير المحددة.

أضف الخرزات إلى معلق الخلايا الليمفاوية البية. ضع الخليط على غطاء مغطى ببولي إل ليسين.

ترتبط الخلايا الليمفاوية البائية سالبة الشحنة بالغطاء موجب الشحنة ، مما يؤدي إلى شل حركة الخلايا. علاوة على ذلك ، ترتبط مستضدات الخرز على وجه التحديد ب BCRs. ينشط تفاعل BCR مع المستضد الخلايا الليمفاوية البائية ، مما يشكل تقاطعا ضيقا - مشبك مناعي.

يبدأ

التفاعل مسارات الإشارات داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى إعادة تنظيم الهيكل الخلوي للأكتين. يتسبب هذا في انتشار غشاء الخلية متبوعا بالانكماش ، حيث يتركز العنقود الدقيق لمستضد BCR في مركز المشبك المناعي.

مع إعادة تشكيل الأكتين ، يعيد الجسيم المركزي - مركز تنظيم الأنابيب الدقيقة - التموضع بالقرب من المشبذ. تقوم إعادة التموضع بتجنيد العضيات مثل الجسيمات الحالة وجهاز جولجي بالقرب من المشبك المناعي لاستخراج المستضدات وتقديمها.

يتم تحضير الخرز المطلي بالمستضد عن طريق احتضان روابط معينة بالخرز الأميني الذي سبق معالجته بالجلوتارالديهايد لتنشيط المجموعات الأمينية. أعد تعليق الخرزات المنشطة في 100 ميكرولتر من PBS والدوامة. في هذه الأثناء ، قم بإعداد محلول المستضد عن طريق إضافة 100 ميكروغرام لكل مل من ترابط BCR في 150 ميكرولتر من PBS.

بعد ذلك ، أضف 50 ميكرولترا من الخرز المنشط إلى محلول المستضد ، واحتضنه طوال الليل عند 4 درجات مئوية. تذكر أيضا استخدام رابط غير ذي صلة كتحكم سلبي. بعد الحضانة ، اغسل الخرزة باستخدام PBS ، واستنشق المادة الطافية ، واستبدلها ب PBS. كرر ثلاث مرات. بعد ذلك ، قم بحظر المجموعات الأمينية الحرة عن طريق تعليق الخرز في 500 ميكرولتر من محلول BSA. أخيرا ، أعد تعليق الخرز في 70 ميكرولتر من PBS.

لحساب التركيز النهائي ، يمكنك استخدام مقياس الدم لحساب الخرز. لتنشيط الخلايا البائية ، استخدم أنبوبا سعة 50 مل وأعد تعليق الخلايا إلى تركيز 1.5 مليون لكل مل في CLICK مع مصل بقري جنيني بنسبة 5٪. بعد ذلك ، أضف 150.000 خلية بائية تتوافق مع 100 ميكرولتر من خليط حبة الخلية إلى غطاء مطلي ب poly-L-lysine ، واحتضانه عند 37 درجة للنقاط الزمنية المختلفة.