JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:41 د • July 8th, 2025
يتضمن تنشيط الخلايا البائية التعرف على المستضدات بواسطة مستقبلات الخلايا البائية ، BCRs ، على سطحها لاستنباط استجابة مناعية.
لدراسة تنشيط الخلايا البائية في المختبر ، ابدأ بغطاء يحتوي على مستضدات وأجسام مضادة مضادة ل CD45R ، مثبتة على مادة بوليمرزية. تتفاعل المستضدات والأجسام المضادة سالبة الشحنة مع البوليمرات الموجبة الشحنة على الغطاء من خلال التفاعلات الكهروستاتيكية.
قم بتراكب الغطاء المطلي بوسط يحتوي على خلايا بائية واحتضانه. يتفاعل CD45R - البروتين الغشائي للخلايا البائية - مع الأجسام المضادة الثابتة ، مما يسهل التصاق الخلايا.
تتفاعل BCRs الموجودة على الخلية البائية الملتصقة مع مستضد ، وتشكل مشبك مناعي - منطقة التنسيق لإشارات الخلية واستيعاب المستضد. هذا يعزز إعادة تشكيل الهيكل الخلوي ويبدأ انتشار الخلايا ، مما يزيد من سطح الخلية الملامسة للمستضدات.
تؤدي إعادة التشكيل الإضافية إلى حركة المستضدات المقترنة ب BCR نحو مركز المشبك المناعي. تؤدي إعادة الترتيب الخلوي هذه إلى إعادة وضع الجسيم المركزي بالقرب من الغشاء المشبكي الذي يوجه العضيات داخل الخلايا ، بما في ذلك الجسيمات الحالة ، نحو المشبك.
يؤدي اندماج الجسيمات الحالة مع الغشاء إلى استيعاب مجمعات المستضد BCR. تتم معالجة المستضدات الداخلية في شظايا الببتيد ، وتحميلها على مركب التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الثانية أو جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير ، ويتم تقديمها أخيرا على الخلايا البائية المنشطة.
قم بإعداد محلول المستضد عن طريق إضافة مضاد BCR و B220 في PBS إلى تركيز نهائي يبلغ 10 ميكروغرام لكل مل و 7.5 ميكروغرام لكل مل على التوالي. بعد ذلك ، ضع الغطاء فوق غطاء من صفيحة 24 بئرا مغطاة بغشاء البارافين ، وأضف 40 ميكرولترا من محلول المستضد. أغلق اللوحة ، ثم احتضن عند أربع درجات طوال الليل.
لبدء التنشيط في الغطاء ، قم أولا بغسلها باستخدام PBS ، واتركها تجف لبضع دقائق. بعد ذلك ، أضف 150.000 خلية بائية ، واحتضن عند 37 درجة للنقاط الزمنية المختلفة. في كلتا الحالتين ، عند التنشيط إما بالخرز أو الشرائح المطلية بالمستضد ، نوصي بالبدء بأطول نقطة زمنية ، ثم الانتقال إلى النقاط الأقصر.
توضح هذه المقالة بروتوكولاً مخبرياً لدراسة ديناميكيات العضيات في الخلايا البائية أثناء تكوين المشبك المناعي. تركز هذه الطريقة على تسلسل الأحداث التي تلي التعرف على المستضد بواسطة مستقبلات الخلايا البائية (BCRs)، بما في ذلك إعادة تشكيل الهيكل الخلوي، وتكوين المشبك المناعي، وحركة الليزوزومات، واستيعاب المستضد، وعرض المستضد على جزيئات MHC class II.
يسمح تنشيط الخلايا البائية (B cells) في المختبر على شرائح غطائية مطلية بالمستضد بالتحليل الدقيق لتكوين المشبك المناعي وديناميكيات العضيات، مما يدعم الاكتشافات في المراحل المبكرة من علم المناعة. ويوفر هذا النظام وضوحاً ميكانيكياً لعمليتي معالجة المستضد وعرضه، مما يساهم في التحقق من صحة الأهداف وتقليل المخاطر في تطوير العلاجات المناعية. ويعزز هذا النهج من الثقة التنبؤية لعمليات الفحص اللاحقة والأبحاث الترجمية في المناعة التكيفية.
تتكامل هذه الطريقة ضمن تسلسل عمليات الاكتشاف، بدءاً من الدراسات الميكانيكية المبكرة وصولاً إلى أبحاث المناعة قبل السريرية، مما يدعم كلاً من التحقق من الهدف وجاهزية المقايسة.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026