موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:20 دقيقة • July 8th, 2025
للحث على التهاب القولون - مرض التهاب الأمعاء - في نموذج الفئران ، خذ فأرا موجودا في قفص.
استبدل مياه الشرب بمحلول من كبريتات ديكستران الصوديوم ، DSS ، وهو عديد السكاريد المسبب لالتهاب القولون. اسمح للفأر باستهلاك المحلول للإصابة بالتهاب القولون.
عند الاستهلاك ، يدخل DSS إلى تجويف قولون الفأر. يحتوي القولون على طبقة مخاطية سميكة ، مما يوفر حاجزا ماديا بين الميكروبات المتعايشة والطبقة الأحادية للخلية الظهارية الأساسية.
يخترق DSS الطبقة المخاطية ، ويدخل الخلايا الظهارية. داخل الخلايا ، يغير DSS التعبير عن البروتينات المشدودة الوصلة ويحفز موت الخلايا المبرمج ، مما يؤدي إلى تعطيل الطبقة الظهارية والحاجز المخاطي. يسمح ذلك بدخول الميكروبات اللمعية إلى الصفيحة المخصوصة - الأنسجة الأساسية التي تحتوي على خلايا شجيرية ومقيمة.
تتعرف الخلايا المناعية على الميكروبات ، وتنشط الإشارات النهائية لإفراز السيتوكينات المؤيدة للالتهابات. تسبب السيتوكينات تسلل عدد كبير من الخلايا التائية التي تؤدي إلى استجابة مناعية مبالغ فيها ، مما يؤدي إلى التهاب.
راقب الفأر المعالج بحثا عن اضطرابات الجهاز الهضمي وفقدان الوزن ، مما يشير إلى ظهور التهاب القولون.
القتل الرحيم للفأر ؛ عزل القولون بأكمله جراحيا. قسم القولون إلى أقسام قريبة ومتوسطة وبعيدة وأضف مثبتا للحفاظ على الأنسجة.
الأنسجة جاهزة للمقايسات النهائية لتقييم التهاب القولون.
للحث على كبريتات ديكستران الصوديوم ، أو التهاب القولون DSS ، استبدل مياه الشرب العادية بمحلول DSS بنسبة 3٪ مؤقتا لمدة سبعة أيام ، وقياس وزن جسم كل فأر ، واستهلاك محلول DSS ، وإنتاج البراز يوميا. في نهاية العلاج الذي يستمر سبعة أيام ، ضع الفأر في وضع الاستلقاء ، واستخدم مقصا صغيرا لعمل شق خط الوسط بطول ثلاثة سنتيمترات في البطن.
بعد ذلك ، استخدم الملقط لرفع القولون للسماح بفصله عن المساريق المحيط ، واستخرج القولون بالكامل حتى يظهر الأعور والمستقيم. قم بتمرير الأنسجة على هامش القولون وعمق الحوض ، لتحرير القولون القريب والبعيد على التوالي.
قم بقياس وتسجيل طول القولون المعزول ، واستخدم حقنة سعة 10 ملليلتر مزودة بإبرة تزقيم لشطف القولون ب 10 مل من PBS المثلج لإزالة البراز والدم حتى يصبح الشطف صافيا. لتحديد النسيج ، قسم عينات الأنسجة إلى أقسام قريبة ومتوسطة وبعيدة متساوية الحجم ، وقم بإصلاح الأنسجة في 4٪ بارافورمالدهيد طوال الليل عند أربع درجات مئوية.