تخليق الأغشية الحيوية في المختبر بواسطة المكورات العنقودية الذهبية

الأغشية الحيوية البكتيرية عبارة عن هياكل ثلاثية الأبعاد تتكون من مجتمعات بكتيرية مدمجة في مصفوفة خارج الخلية ذاتية الإنشاء ، والتي تتهرب من الاستجابة المناعية للمضيف.

لتحضير الأغشية الحيوية في المختبر المكورات العنقودية الذهبية ، قم بنقل تعليق المكورات العنقودية الذهبية المتنامي بنشاط لكثافة الخلية المرغوبة إلى الآبار المطلية ب poly-L-lysine لصفيحة متعددة الآبار.

أثناء الحضانة في ظل ظروف ثابتة ، يسهل طلاء بولي L-lysine موجب الشحنة التفاعلات الكهروستاتيكية مع البوليمرات السكرية سالبة الشحنة ، مثل أحماض teichoic ، على سطح البكتيريا ، مما يعزز الارتباط البكتيري.

مع مصادر المغذيات المتاحة ، تنقسم المكورات العنقودية الذهبية وتتراكم ، وتشكل مستعمرات دقيقة. بالإضافة إلى ذلك ، تفرز البكتيريا مصفوفة خارج الخلية تتكون من السكريات والبروتينات والحمض النووي خارج الخلية ، والتي تغلف الخلايا وتعزز تماسك البكتيريا والتصاق السطحي.

مع استمرار انقسام الخلية وإفراز المصفوفة ، ينضج الأغشية الحيوية إلى بنية ثلاثية الأبعاد مع توزيع فعال لجزيء الإشارات للاتصال من خلية إلى خلية.

عند الوصول إلى عتبة الكثافة البكتيرية ، تفرز المكورات العنقودية الذهبية البروتياز والنوكليازات ، مما يؤدي إلى تدهور مصفوفة الأغشية الحيوية وإطلاق عدد قليل من المكورات العنقودية الذهبية في الوسائط. قم بإزالة الوسائط التي تحتوي على بكتيريا العوالق العائمة بحرية.

أضف حاجزا برفق لمنع اضطراب الأغشية الحيوية. قم بإزالة المخزن المؤقت الذي يحتوي على أي بكتيريا متبقية غير متصلة.

الأغشية الحيوية التي تم إنشاؤها جاهزة للتجارب النهائية.

ابدأ بالحصول على مستعمرات معزولة من المكورات العنقودية الذهبية من مخزون محفوظ بالتبريد باستخدام تقنية صفيحة الخط على طبق أجار غني بالمغذيات مثل أجار الصويا التريبتيكي. قم بتغطية الآبار الفردية لصفيحة 96 بئرا ب 100 ميكرولتر من PLL المخففة بالماء المعقم ، واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. قم بشفط محلول PLL بشكل معقم باستخدام مصيدة الشفط بمساعدة الفراغ. اترك الآبار تجف طوال الليل في درجة حرارة الغرفة.

قم بإعداد مزرعة ليلية عن طريق تلقيح مستعمرة من المكورات العنقودية الذهبية في MEM-alpha مكملة بالغلوكوز بنسبة 2٪ ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 16 إلى 18 ساعة بمعدل 200 دورة في الدقيقة. قم بتخفيف المزرعة الليلية عن طريق نقل 50 ميكرولتر إلى 5 ملليلتر من MEM-alpha الطازج المكمل بنسبة 2٪ جلوكوز. ثم احتضنها عند 37 درجة مئوية بمعدل 200 دورة في الدقيقة حتى يتم تحقيق منتصف المرحلة اللوغاريتمية. استخدم MEM-alpha لتطبيع الثقافة اللوغاريتمية المتوسطة إلى OD 0.1.

انقل 150 ميكرولترا من الثقافة الطبيعية إلى كل بئر من الصفيحة المكونة من 96 بئر المعالجة ب PLL. احتضان اللوحة في غرفة رطبة عند 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 20 ساعة. استنشاق المادة الطافية لإزالة الخلايا العوالق. اغسل الكتلة الحيوية المتبقية برفق ب 150 ميكرولتر من HBSS لإزالة الخلايا غير المتصلة. كرر مرتين على الأقل لإزالة جميع الخلايا العوالق.