القياس الكمي للوسطاء الالتهابيين في الخلايا المشتقة من الأنسجة البشرية المصابة

0 views • 3:45 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثناء العدوى، تطلق الخلايا الليمفاوية المنشطة وسطاء التهابيين — السيتوكينات — لإثارة استجابة مناعية.

لتحديد الوسطاء الالتهابيين في الأنسجة المصابة ، ابدأ بتعليق خلوي يحتوي على خلايا مناعية مشتقة من أنسجة الرئة البشرية.

احتضان الخلايا بالمستدمية النزلية — وهي بكتيريا مسببة للأمراض في الجهاز التنفسي. تتفاعل المستضدات السطحية للبكتيريا مع مستقبلات التعرف على الأنماط على الخلايا المناعية البلعمة. يؤدي هذا إلى استيعاب البكتيريا ، ومعالجتها إلى ببتيدات أصغر ، وعرض الببتيد بواسطة جزيء مركب التوافق النسيجي الرئيسي.

يرتبط جزيء المستضد معقد التوافق النسيجي الكبير الثاني على الخلايا البلعمية بالخلايا الليمفاوية التائية من خلال مستقبلات الخلايا التائية ، جنبا إلى جنب مع تفاعلات المستقبلات التحفيزي المشترك ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا الليمفاوية التائية وإنتاج السيتوكينات المؤيدة للالتهابات.

عالج الخلايا بحاصرات جولجي، مما يضعف إطلاق السيتوكين — مما يتسبب في تراكمها داخل الخلايا. اغسل الخلايا بمخزن مؤقت مانع لمنع مواقع الربط غير المحددة.

تلطيخ معلق الخلية بمزيج من الأجسام المضادة المسماة بالفلوروفور والتي ترتبط على وجه التحديد بعلامات سطح الخلايا الليمفاوية التائية البشرية ، مما يتيح وضع العلامات على الخلايا الليمفاوية.

قم بإصلاح الخلايا ، ونفغلها باستخدام خافض للتوتر السطحي مكون للمسام. احتضان الخلايا المنفذة بالأجسام المضادة للسيتوكين المسماة بالفلوروفور ، والتي تدخل الخلايا وتتفاعل مع سيتوكينات معينة.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، قم بقياس إشارة تألق السيتوكين داخل الخلايا الليمفاوية المسماة ، والتي ترتبط بإنتاج الوسيط الالتهابي بسبب العدوى البكتيرية.

قم بتقطيع حوالي 20 إلى 40 جراما من عينة استئصال الفص إلى أقسام من 3 إلى 5 ملليمترات مكعبة. ضعها داخل غرفة معقمة سعة 50 ميكرولتر ، وقم بتقطيع الأنسجة ميكانيكيا باستخدام أداة تفكيك مناسبة. بعد تفكيك الأنسجة ، قم بتحلل خلايا الدم الحمراء كما هو موضح وأعد تعليق الخلايا في RPMI المعقم. بعد ذلك ، قم بتصفية الخلايا من خلال شبكة نايلون معقمة 100 ميكرومتر ، واحسب عدد الخلايا القابلة للحياة باستخدام طريقة استبعاد التريبان الأزرق.

بالنسبة لمقايسة العدوى ، أعد تعليق خلايا الرئة في RPMI إلى تركيز نهائي قدره 4 ملايين خلية لكل مليلتر لكل أنبوب. بعد ذلك ، قم بإصابة الخلايا في وزارة الداخلية من 100 بكتيريا لكل خلية. قم بفك الغطاء نصف دوران للسماح بنقل الغاز في الأنابيب. ضع الخلايا في دوار الأنبوب ، واحتضنها عند 37 درجة مئوية ، أثناء الدوران عند 12 دورة في الدقيقة. بعد ساعة واحدة من التحفيز ، أضف Brefeldin A لمنع تصدير السيتوكينات خارج الخلية ، واحتضان معلقات الخلية لمدة 16 إلى 22 ساعة أخرى مع الدوران.

في اليوم التالي ، اغسل معلق الخلية ب 500 ميكرولتر من PBS يحتوي على 1٪ ألبومين مصل بقري و 0.01٪ أزيد الصوديوم. بعد ذلك ، ابق في تعليق الخلية للحصول على علامات سطح خلايا الخلايا الليمفاوية البشرية المحددة لمدة ساعة واحدة. بعد ذلك ، اغسل الخلايا باستخدام PBS وقم بإصلاحها ونفاذها ، كما هو موضح سابقا. بعد ذلك ، احتضان الخلايا بالأجسام المضادة لتلوين السيتوكينات داخل الخلايا لمدة ساعة واحدة. بعد ذلك ، اغسل الخلايا وأعد تعليقها في 100 ميكرولتر من PBS ، قبل الحصول على البيانات على مقياس التدفق الخلوي.

09:25

تنفيذ نظام العدوى أساس إدراج-نافذ غشاء لدراسة آثار يفرز البكتيرية السموم على خلايا المضيف الثدييات

Related Videos

0 Views

10:10

العدوى التجريبية مع المستوحدة الليستيريا نموذجا لدراسة المضيف الردود انترفيرون γ

Related Videos

0 Views

09:11

تصوير إنتاج غاما للإنترفيرون في الموقع في طحال الفأر بعد عدوى الليستيريا أحادية الخلايا

Related Videos

0 Views

08:54

وفي الإنسان ، فيفو الأحيائي لقياس محددة من الأنسجة وسطاء Nociceptive التهابية

Related Videos

0 Views

06:29

دقيقة وبسيطة قياس الموالية للالتهابات سايتوكاين 1β ايل باستخدام تحفيز الدم الجامعة الفحص

Related Videos

0 Views

07:58

الكمية التصوير من النسب المحددة اشارة مستقبلات بوساطة الرقم تشبه في وحيدات والخلايا الجذعية من عينات صغيرة من دم الإنسان

Related Videos

0 Views

02:55

القياس الكمي لمستويات الوسيط المناعي في سائل بطانة الغشاء المخاطي البشري

Related Videos

0 Views

12:21

A منصة الآلي تنوعا للتجارب تحفيز الخلية الصغيرة الحجم

Related Videos

0 Views

09:00

توصيف الخلايا المناعية والوسطاء الالتهابيين في البيئة الرئوية

Related Videos

0 Views

07:51

مفاعل حيوي متعدد العظة لتقييم القدرة الالتهابية والتجديدية للمواد الحيوية تحت التدفق والتمدد

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026