موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:21 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ثقافة البلاعم. تصيب ببروتين الفلورسنت التي تعبر عن الليستريا مونوسيتوجينس، Lm.
ترتبط البروتينات الموجودة على Lm بمستقبلات ضامة محددة ، مما يستوعب البكتيريا داخل البلعمة. بالإضافة إلى ذلك ، يفرز Lm السموم المكونة للمسام التي تعطل غشاء البلعمة ، وتطلق البكتيريا في العصارة الخلوية ، حيث تتكاثر وتصبح محاطة بخيوط الأكتين المضيفة.
تحفز بروتينات ActA المحفزة لتجميع الأكتين على Lm بلمرة الأكتين المستمرة في الطرف الخلفي للبكتيريا. يدفع ذيل مذنب الأكتين المتولد Lm عبر العصارة الخلوية ويخترق غشاء خلية البلاعم ، ويطلق Lm المبلمر المغلف بالأكتين في الوسائط.
بعد الحضانة ، قم بجمع وإصلاح الوسائط خارج الخلية ، المرتبطة بالأكتين ، المحتوية على LM من مجموعة من الآبار. إصلاح Lm باستخدام بارافورمالدهايد. أضف الماء المقطر ، وتمزق البلاعم وإطلاق LM داخل الخلايا. اجمع Lm داخل الخلايا وقم بإصلاح العينة باستخدام بارافورمالدهايد.
في الآبار الأخرى ، استبدل الوسائط بوسائط تحتوي على جنتاميسين غير منفذة للخلية للتخلص من LM خارج الخلية. استبدلها بوسائط جديدة واحتضانها للفترة المطلوبة.
بعد الحضانة ، اجمع الوسائط المحتوية على Lm خارج الخلية وقم بإصلاح العينة باستخدام بارافورمالدهايد. استخدم الماء المقطر للحصول على الليزات التي تحتوي على Lm داخل الخلايا وإصلاح العينة باستخدام بارافو
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية