الكشف عن تنشيط الالتهابات عن طريق المجهر الفلوري

للكشف عن المستقبلات الشبيهة بالNOD P3 ، أو NLRP3 ، تنشيط الالتهابات ، خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ضامة نشطة تعبر عن بروتينات NLRP3.

عالج الخلايا بوسائط تحتوي على الأيونوفورات والجلايسين. تحفز الأيونوفورات تدفق أيونات البوتاسيوم ، وتنشط بروتينات NLRP3 وتقليلها. يقوم NLRP3 قليل القلة بتجنيد بروتينات المحول ، مما يسهل ارتباط pro-caspase-1 ، وتشكيل مركب NLRP3 inflammasome.

على الالتهابات ، يؤدي القرب إلى الانقسام الذاتي المؤيد للكاسباز -1 ، وإطلاق الكاسبيس النشط ، وبدء داء الحمى والتكثيف النووي. بالإضافة إلى ذلك ، يعمل الجلايسين على استقرار بنية الخلية ، مما يمنع تحلل الخلايا.

عالج البلاعم باستخدام مجسات مراسل الفلورسنت التي تحتوي على مجموعة ربط كاسباز -1 وفلوروفور مرتبط عبر تسلسل الأحماض الأمينية. يتعرف الكاسباز -1 المنشط على تسلسل الأحماض الأمينية للمسبار ويرتبط بمجموعة ربط الكاسباز ، مما يتيح تصوره.

قم بإصلاح الخلايا وتراكبها بصبغة الفلورسنت لتلطيخ النوى. صورة تحت المجهر الفلوري.

عد البلاعم ذات النوى المكثفة الزرقاء وبؤر الفلورسنت الخضراء من الكاسباز المنشط -1 ، مما يشير إلى تنشيط NLRP3 للالتهابات.

ابدأ باستبدال الوسيط من البلاعم المشتقة من نخاع العظام المزروعة على أغطية زجاجية ب 290 ميكرولتر من وسط DMEM-5 مكمل ب 5 ميكرومولار نيجيريسين و 5 ملليمولار جلايسين لكل بئر. أعد الصفيحة