موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:57 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أنبوبا زجاجيا يحتوي على تجانس العدلات مع مكونات داخل الخلايا.
أضف الميثانول ، وهو مذيب قطبي ، يعطل تفاعلات الدهون والدهون والبروتين. توزع القطبية المتأصلة في الميثانول الدهون القطبية بالتساوي ، وتذويبها. بعد ذلك ، أضف الكلوروفورم ، وهو مذيب عضوي غير قطبي ، يتفاعل مع الدهون غير القطبية ، مما يؤدي إلى تشتتها وذوبانها.
جهاز طرد مركزي لفصل الحبيبات المحتوية على البروتين عن المادة الطافية التي تحتوي على الدهون والسكريات وحطام الخلايا. انقل المادة الطافية إلى أنبوب زجاجي جديد. أضف الكلوروفورم والماء المقطر. الطرد المركزي العينة.
تشكلإضافة الماء تلقائيا نظاما ثنائي الطور ، مما يقسم الجزيئات الحيوية داخل طبقات الكلوروفورم السفلية والطبقات العليا من ميثانول الماء.
تتكون طبقة الكلوروفورم من دهون غير قطبية مذابة ، بينما تحتوي الطبقة العليا على ملوثات غير دهنية والمزيد من الدهون القطبية. قم بإزالة الطبقة العليا من الماء والميثانول دون إزعاج الطبقة المحتوية على الدهون.
استخدم مكثف فراغ لإزالة المذيب من الدهون. يحفظ في درجات حرارة منخفضة حتى الاستخدام الآخر.
لعزل الدهون عن العدلات المشتقة من الدم المحيطي البشري ، خذ العدلات المحضرة وضعها على الجليد. قم بتقطيع العدلات إلى أنبوب زجاجي بغطاء لولبي سعة 15 مليلتر مع ختم PTFE ، وتجانسها عن طريق الرج لمدة دقيقة واحدة. ثم أضف 2 ملليلتر من الميثانول ، متبوعا بعد دقيقة واحدة ب 1 مليلتر من الكلوروفورم. بعد الاهتزاز لمدة دقيقة أخرى ، قم بتدوير الأنابيب الزجاجية في درجة حرارة الغرفة و 50 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة.
بعد ذلك ، قم بتكبيل جزء البروتين عن طريق الطرد المركزي للمحلول عند 7 درجات مئوية و 1952 مرة جم لمدة 10 دقائق. صب المادة الطافية بعناية في أنبوب غطاء لولبي زجاجي جديد سعة 15 مليلتر تاركا الحبيبات المحتوية على البروتين وراءها. قم بتخزين الحبيبات عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر لتقديرها الكمي في المستقبل.
أضف 1 مليلتر من الكلوروفورم وانتظر دقيقة واحدة. ثم أضف 1 مليلتر من الماء المقطر المزدوج واقلب أنبوب الغطاء اللولبي الزجاجي بالعينة لمدة 30 ثانية. بعد الطرد المركزي للعينة كما كان من قبل ، قم بإزالة المرحلة العليا وتجاهلها وصولا إلى الطبقة الغائمة على سبيل المثال لا الحصر. جفف العينات في مكثف مفرغ عند 60 درجة مئوية وقم بتخزينها عند 20 درجة مئوية تحت الصفر لحين الحاجة.