نظام عدوى قائم على إدراج غشاء قابل للاختراق لدراسة تأثير السموم البكتيرية

خذ نظام عدوى من غرفتين مفصول بغشاء قابل للاختراق. تحتوي الحجرة السفلية على خلايا كيراتينية بشرية ملتصقة ، أو خلايا جلدية.

أضف مسببات الأمراض البكتيرية في الغرفة العلوية ، واحتضنها. يمنع الغشاء الاتصال المباشر لمسببات الأمراض بالخلايا الكيراتينية. تفرز مسببات الأمراض الستربتوليسين S أو SLS - وهو سم صغير - يعبر الغشاء للوصول إلى الخلايا.

يتوسط الناقل المشترك لبيكربونات الصوديوم على الخلايا الكيراتينية في تدفق أيونات البيكربونات والصوديوم ، مما يحافظ على درجة الحموضة داخل الخلايا. يرتبط SLS بالناقل المشترك ويعطل نقل الأيونات ، مما يؤدي إلى إجهاد تناضحي داخل الخلايا.

تتسبب إشارات المصب الناجمة عن الإجهاد في تدهور المثبط المرتبط بالعامل النووي المعزول - Kappa B ، أو NF-κB ، مما يؤدي إلى تنشيطه. ينتقل NF-κB المنشط إلى النواة ، مما يؤدي إلى تنظيم إنتاج السيتوكين المؤيد للالتهابات.

عند الإفراز خارج الخلية ، ترتبط السيتوكينات بمستقبلات الموت على الخلية المضيفة ، مما يؤدي إلى حدوث نخر. بعد الحضانة ، حصاد المادة الطافية للثقافة لتقييم تأثير السم البكتيري.

قبل العلاج مباشرة ، استخدم 1X PBS لغسل الخلايا. بعد ذلك ، ضع 2 مل من وسط النمو الطازج مع أو بدون علاج دوائي على الألواح المكونة من ستة آبار ، أو 0.5 مل من الوسط على آبار ألواح 24 بئرا. بعد ذلك ، تحت غطاء التدفق الصفحي ، استخدم ملقطا معقما لو