استخراج محللة الخلية المضيفة من الخلايا المضيفة المصابة المزروعة في نظام غشاء قابل للاختراق

ابدأ بزرع الخلايا المضيفة للثدييات في المقصورة السفلية لنظام الغشاء النفاذ.

أضف المكورات العقدية — وهي بكتيريا مسببة للأمراض معروفة بإفراز الستربتوليسين S أو توكسين SLS، إلى حشوة الغشاء. ينتشر سم SLS عبر مسام الغشاء ويصل إلى الخلية المضيفة.

تنظم الناقلات المشتركة للصوديوم وبيكربونات المرتبط بالغشاء نقل الأيونات ، مما يحافظ على التوازن الخلوي. يرتبط السم بهذه الناقلات المشتركة ، مما يعطل نقل الأيونات ويسبب الإجهاد التناضحي في الخلايا المضيفة.

يؤدي هذا إلى تنشيط العديد من شلالات الإشارات النهائية ، بما في ذلك p38 MAPK ، وهو مسار بروتين كيناز منشط بالميتوجين. يقوم p38 MAPK المنشط بفسفرة أهدافه النهائية ، مما يؤدي إلى استجابة خلوية ضد البكتيريا.

بعد ذلك ، قم بإزالة إدراج الغشاء النفاذ. استنشق الوسط فوق الخلايا المضيفة. أضف المخزن المؤقت للتحلل لتحرير المحتويات الخلوية. جهاز طرد مركزي لتكسير حطام الخلية.

اجمع المادة الطافية التي تحتوي على مكونات المحللة القابلة للذوبان والحبيبات التي تحتوي على مكونات محللة غير قابلة للذوبان. قم بتخزين العينات لمزيد من التحليل.

قبل العلاج مباشرة ، استخدم 1X PBS لغسل الخلايا. بعد ذلك ، ضع 2 مل من وسط النمو الطازج مع أو بدون علاج دوائي على الألواح المكونة من ستة آبار ، أو 0.5 مل من الوسط على آبار ألواح 24 بئرا. بعد ذلك ، تحت غطاء التدفق الصفحي ، استخدم ملق