موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:43 دقيقة • July 8th, 2025
خذ غرفة تصوير تحتوي على مزرعة للخلايا الظهارية البشرية المحملة بمؤشر فلوري للكالسيوم داخل الخلايا.
أضف وسط نمو يحتوي على أيونات الكالسيوم. إدخال الشيغيلا, بكتيريا المسببة للأمراض, واحتضن.
يخترق نظام الإفراز البكتيري الخلية المضيفة ويطلق مؤثرات الغزو. يؤدي الغزو إلى إعادة ترتيب الأكتين ، مما يؤدي إلى تشكيل غشاء حول البكتيريا.
في موقع الغزو ، يتم تنشيط الفوسفوليباز C ، أو PLC ، على غشاء البلازما ، وتتجمع مستقبلات ثلاثي الفوسفات الإينوزيتول على الشبكة الإندوبلازمية أو ER.
يحلل PLC غشاء فوسفاتيديلينوسيتول 4،5-ثنائي الفوسفات إلى ثلاثي الفوسفات الإينوزيتول ، أو IP3 ، الذي يتراكم محليا بسبب شبكة الأكتين الكثيفة.
يرتبط IP3 بالمستقبلات الموجودة في غرفة الطوارئ ، مما يتسبب في إطلاق الكالسيوم. ترتبط مؤشرات الكالسيوم بالأيونات المنبعثة وتنبعث منها مضان ، مما يعرض استجابة كالسيوم المحلية.
ينتشر IP3 ببطء من خلال الأكتين ، مما يؤدي إلى استنفاد مستوى الكالسيوم ER وتنشيط قناة الكالسيوم الغشائية في البلازما ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم.
يشير التألق عبر الخلية إلى تأخر استجابة الكالسيوم العالمية.
ضع الغطاء الذي يحتوي على خلايا Fluo-4 في غرفة تصوير أو حجرة ذات قاع زجاجي. استخدم المخزن المؤقت EM لغسل العينة ثلاث مرات لإزالة المركبات التي يحتمل أن تكون ناتجة عن تحلل الخلايا. ثم أضف ملليلتر واحد من المخ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية