تقنية تصوير لدراسة استجابة الكالسيوم في الخلايا المصابة بالبكتيريا

0 مشاهدات3:43 د • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خذ غرفة تصوير تحتوي على مزرعة للخلايا الظهارية البشرية المحملة بمؤشر فلوري للكالسيوم داخل الخلايا.

أضف وسط نمو يحتوي على أيونات الكالسيوم. إدخال الشيغيلا, بكتيريا المسببة للأمراض, واحتضن.

يخترق نظام الإفراز البكتيري الخلية المضيفة ويطلق مؤثرات الغزو. يؤدي الغزو إلى إعادة ترتيب الأكتين ، مما يؤدي إلى تشكيل غشاء حول البكتيريا.

في موقع الغزو ، يتم تنشيط الفوسفوليباز C ، أو PLC ، على غشاء البلازما ، وتتجمع مستقبلات ثلاثي الفوسفات الإينوزيتول على الشبكة الإندوبلازمية أو ER.

يحلل PLC غشاء فوسفاتيديلينوسيتول 4،5-ثنائي الفوسفات إلى ثلاثي الفوسفات الإينوزيتول ، أو IP3 ، الذي يتراكم محليا بسبب شبكة الأكتين الكثيفة.

يرتبط IP3 بالمستقبلات الموجودة في غرفة الطوارئ ، مما يتسبب في إطلاق الكالسيوم. ترتبط مؤشرات الكالسيوم بالأيونات المنبعثة وتنبعث منها مضان ، مما يعرض استجابة كالسيوم المحلية.

ينتشر IP3 ببطء من خلال الأكتين ، مما يؤدي إلى استنفاد مستوى الكالسيوم ER وتنشيط قناة الكالسيوم الغشائية في البلازما ، مما يؤدي إلى تدفق الكالسيوم.

يشير التألق عبر الخلية إلى تأخر استجابة الكالسيوم العالمية.

ضع الغطاء الذي يحتوي على خلايا Fluo-4 في غرفة تصوير أو حجرة ذات قاع زجاجي. استخدم المخزن المؤقت EM لغسل العينة ثلاث مرات لإزالة المركبات التي يحتمل أن تكون ناتجة عن تحلل الخلايا. ثم أضف ملليلتر واحد من المخزن المؤقت EM. ضع الغرفة على مرحلة المجهر الفلوري المقلوب ، المسخن عند 33 درجة مئوية. حدد حقل الفحص المجهري ، وقم بإعداد معلمات الاستحواذ ، بما في ذلك وقت التعرض والتجميع ، إذا لزم الأمر ، لتحسين إشارة الفلورسنت Fluo-4.

لإضافة البكتيريا إلى العينة ، قم بإزالة 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت EM بعناية من الغرفة ، وأضف 500 ميكرولتر من المعلق البكتيري للحصول على OD600 نهائي من 0.05. قم بإجراء عملية استحواذ على الفور ، أو انتظر 10 دقائق للسماح للبكتيريا بالترسيب على الخلايا. في نهاية تيار الاستحواذ ، احصل على صورة تباين الطور للحقل المحدد لتصور البكتيريا التي تلامس الخلايا والكشكشة الغشائية المرتبطة بمواقع الغزو البكتيري.

كرر إجراء الاستحواذ على فترات زمنية قابلة للتخصيص لمدة الحصول على الصور وحفظ الملفات واختيار حقل جديد لتغطية العملية برمتها. في نهاية إجراء الاستحواذ ، أضف إلى العينة اثنين من ميكرومولار من أيونوفور الكالسيوم يونومايسين لتحديد السعة القصوى لإشارات الكالسيوم. احصل على الصور كل 3 إلى 5 ثوان حتى تستقر الإشارة ، عادة لمدة تقل عن 10 دقائق.

اتبع ذلك بإضافة مخلب الكالسيوم EGTA إلى التركيز النهائي البالغ 10 مللي مولار لتحديد إشارة الفلورسنت في حالة عدم وجود الكالسيوم. احصل على الصور كل 3 إلى 5 ثوان حتى استقرار الإشارة ، عادة لمدة تقل عن 10 دقائق. قم بإجراء تحليل الصور وفقا لبروتوكول النص.

08:03

تصوير ديناميات الكالسيوم في السكان الفرعيين من خلايا الفئران جزيرة البنكرياس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

07:15

توصيف أحادي الخلية لتدفق الكالسيوم والعدوى بفيروس نقص المناعة البشرية-1 باستخدام منصة متعددة المقاييس Optofluidic

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:11

الحقن الفيروسي المجسم، وزرع عدسة مؤشر التدرج لتصوير الكالسيوم العميق للدماغ في الجسم الحي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

12:15

التصوير الكالسيوم من الخلايا العصبية باستخدام Fura القشرية ، 02:00

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

02:23

تصوير الكالسيوم: طريقة لتصور النشاط العصبي في C. ايليجانس الحي

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:32

التصوير المباشر من الكالسيوم مع ER-المستهدفة استريز المستحثة صبغ تحميل (TED)

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:06

الكالسيوم في الجسم الحي التصوير الخلايا العصبية في C. ايليجانس

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

09:30

التصوير المحلية الكالسيوم 2+ الإشارات في خلايا الثدييات مثقف

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

08:56

التصوير Ca2 + الردود خلال العدوى دوسنتاريا الخلايا الظهارية

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

11:41

تصور التحولات على دائرة الخلايا العصبية الدبقية باستخدام تقنية تصوير الكالسيوم

فيديوهات ذات صلة

0 مرات المشاهدة

آخر تحديث: 15 أغسطس 2026