تحليل المشابك المناعية بين الخلايا التائية البشرية وخلايا الراجي المحملة ب SEB باستخدام قياس التدفق الخلوي للتصوير
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:28 دقيقة • July 8th, 2025
خذ أنابيب قياس التدفق الخلوي التي تحتوي على خلايا راجي غير المحملة والمكورات العنقودية الذهبية السموم المعوية B أو خلايا راجي المحملة ب SEB.
تعمل خلايا الراجي المحملة ب SEB كخلايا بائية مقدمة مستضد بديل تحتوي على المستضد الفائق SEB المركب إلى جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية.
احتضان مع الكريات البيض.
ترتبط مستقبلات الخلايا التائية ، TCRs على الخلايا التائية ب SEBs على خلايا راجي ، والتي ، جنبا إلى جنب مع الإشارات التحفيزية المشتركة ، تنشئ توصلا مستقرا بين الخلية والخلية ، وهو مشبك مناعي ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا التائية.
يؤدي هذا إلى مسارات الإشارات داخل الخلايا ، مما يتسبب في إعادة ترتيب الهيكل الخلوي للأكتين ، مع تجميع جزيئات الإشارات والمستقبلات السطحية داخل المشبك.
بعد الحضانة ، قم بإصلاح الخلايا للحفاظ على هياكلها الخلوية. تخلل الخلايا للوصول إلى الأهداف داخل الخلايا.
أضف الأجسام المضادة المضادة ل CD3 المسماة بالفلوروفور ، والفالودين ، و DAPI ، والتي ترتبط ب CD3 في مركب TCR ، وخيوط الأكتين ، والحمض النووي ، على التوالي.
باستخدام مقياس تدفق التصوير الخلوي ، تصور إشارات الفلورسنت من CD3 والأكتين لتحديد إثرائها في المشبك في وجود SEB.
ابدأ بخلط مليلتر واحد من الدم المحيطي البشري المسحوب حديثا مع 30 مل من محلول تحلل ACK في أنبوب مخروطي سعة 50 ملليلترا. بعد ثما
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية