موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:41 دقيقة • July 8th, 2025
تتصل بعض مسببات الأمراض البكتيرية سالبة الجرام بالخلايا المضيفة وتستخدم أنظمة إفراز لحقن البروتينات المستجيبة ، مما يسهل غزو الخلايا.
لتوصيل البروتينات المستجيبة إلى خلايا الثدييات في المختبر ، قم بتحويل خلايا الثدييات إلى كوفيت مبرد. أضف البروتينات المستجيب البكتيرية المرتبطة بالستربتافيدين الموسومة بالببتيد واخلطها.
إجراء التثقيب الكهربائي. أثناء التشغيل ، تعطل النبضات الكهربائية القصيرة الطبقة الدهنية ثنائية الغشاء الخلوي المضيف لتشكيل مسام عابرة ، مما يسهل الدخول الخلوي للبروتينات المستجيبة. ضع الخلايا على صفيحة زجاجية تحتوي على وسائط ، مما يسمح للخلايا بالتعافي والالتصاق باللوحة. تعيد المسام الإغلاق ، مما يحبس البروتينات بداخلها.
بعد استعادة الخلايا ، قم بإصلاح الخلايا ونفاذها للوصول إلى الأجسام المضادة إلى الأهداف داخل الخلايا. احتضان بمحلول مانع يحتوي على البروتين لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحدد. أضف الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط على وجه التحديد بعلامة الببتيد المرتبطة بالستربتافيدين على البروتينات المستجيب داخل الخلايا.
إدخال الأجسام المضادة الثانوية الموسومة بالفلوروفور والتي ترتبط بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتينات المستجيبة للتصور. أضف جرثومة القمح المترافقة بالفلوروفور agglutinin و DAPI لتلطيخ البروتينات السكرية والحمض النووي لغشاء الخلية ، على ال
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية