نموذج عدوى البلاعم المتمايز تماما للخلايا المشتقة من الخلايا الوحيدة المصابة بالمتفطرة السلية

احصل على ثقافة الضامة المتمايزة تماما في صفيحة متعددة الآبار. تحتوي هذه البلاعم على علامات سطحية ، مثل المستقبلات الشبيهة بالحصيلة أو TLR-2 - مستقبل التعرف على الأنماط الذي يحدد المكونات الميكروبية المختلفة.

أضف كمية مناسبة من المتفطرة السلية المسمى بالفلورسنت أو معلق الخلايا Mtb في كل بئر واحتضنها.

يتعرف TLR-2 على lipoarabinomannan ، أو LAM ، وهو مكون معقد من الجليكوليبيد لجدار الخلية Mtb ، مما يؤدي إلى البلعمة. تستوعب البلاعم Mtb ، وتعزل البكتيريا داخل البلعمة - وهي حجرة مرتبطة بالغشاء.

ينضج البلعمة ، عن طريق الاندماج مع الجسيمات الحالة ، مكونا البلعمة - حجرة حمضية وغنية بالأنزيم.

داخل البلعمة ، يثبط Mtb مضخة البروتون من النوع الفراغي المسؤولة عن توليد درجة حموضة حمضية. وبالتالي ، يصبح الرقم الهيدروجيني داخل البلعمة شبه محايد ، مما يؤدي إلى تعطيل الإنزيمات التي تحلل مسببات الأمراض التي تبتلعها.

يؤثر التفاعل بين LAM و TLR2 أيضا على مسارات إشارات الخلية المضيفة ، مما يؤدي إلى تعديل علامات السطح المشاركة في عرض المستضد.

إن تعطيل البلعمة وتثبيط الاستجابة المناعية للمضيف يمكن Mtb من الاستمرار والتكاثر داخل البلاعم.

لإصابة الخلايا المشتقة من الخلايا الوحيدة ، قم بتخفيف البكتيريا إلى 5 أضعاف 10 إلى الوحدات السادسة المكونة للمستعمرة لكل تركيز مليلتر في وسط خال من المصل ، واستبدل المادة الطافية في كل بئر من لوحة زراعة الخلايا المكونة من ستة آبار ، ب 1 مليلتر من وسط طازج خال من المصل و 1 مليلتر من تعليق البكتيريا لكل بئر للحصول على تعدد العدوى 5.

بعد حضانة لمدة 4 ساعات في حاضنة زراعة الخلايا ، اغسل كل بئر ثلاث مرات باستخدام 1 مليلتر من مخزن الغسيل المعقم لكل غسلة ، مع إمالة اللوحة بعناية لإزالة الحجم الكامل للمخزن المؤقت من زوايا الآبار بعد كل غسلة. بعد ذلك ، قم بإعادة تعليق الخلايا المشتقة من الخلايا الوحيدة المصابة ب MTb في 2 مل من الوسط الكامل بدون مضادات حيوية.