اختبار لدراسة دور الفيترونكتين في التصاق البكتيري بالخلايا الظهارية المضيفة

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على طبقات أحادية للخلايا الظهارية الملتصقة. استبدل الوسائط بوسائط خالية من المصل ، مما يمنع تداخل بروتين المصل. بعد الحضانة ، قم بإزالة الوسائط. اغسل الخلايا بالعازلة. أضف وسائط مبردة خالية من المصل تحتوي على فيترونكتين. احتضان في درجات حرارة منخفضة.

يرتبط مجال RGD الطرفي N للفيترونكتين بمستقبلات الإنتجرين على سطح الخلية الظهارية. تمنع درجات الحرارة المنخفضة الاستيعاب الخلوي لمركب فيترونكتين - إنتجرين.

بعد تشبع مستقبلات الإنتجرين ، قم بإزالة الوسائط. يغسل بمحلول عازل لإزالة الفيترونكتين الزائد، والذي قد يؤثر على ربط الإنتجرين المعتمد على الفيترونكتين البكتيري.

أضف المستدمية النزلية من النوع f ، أو Hif ، وهو مسببات الأمراض البكتيرية سالبة الجرام ، المعلق. حضن.

يرتبط البروتين H الموجود على سطح Hif بالطرف C للفيترونكتين ، مما يسهل التصاق Hif بالخلية الظهارية والاستيعاب اللاحق.

قم بإزالة الوسائط وغسلها بمخزن مؤقت لإزالة Hif غير المقيد. استخدم إنزيم انفصال الخلايا لحصاد الخلايا. أضف وسائط تحتوي على مصل لإيقاف التفاعل الأنزيمي. انقل تعليق الخلية إلى أنبوب زجاجي يحتوي على خرز زجاجي. دوامة لتحلل الخلايا ، وإطلاق البكتيريا الداخلية والمتصلة بالسطح.

خفف المحللة بوسائط خالية من السيروم وبذرة على طبق أجار الشوكولاتة. احتضن Hif لتشكيل مستعمرات. عد المستعمرات.

يشير

ا