تحديد دور الفيترونكتين في مقاومة البكتيريا للنشاط المبيد للجراثيم في المصل البشري

للتحقيق في تأثير فيترونكتين - وهو بروتين سكري مصل بشري ، على البكتيريا ، ابدأ بأنابيب تحتوي على تعليق المستدمية النزلية.

يعالج أحد الأنابيب بمصل بشري طبيعي يحتوي على فيترونكتين والآخر بمصل مستنفد من فيتامين الفيترونكتين. يحتوي كلا النوعين من المصل على أجسام مضادة وبروتينات تكميلية مختلفة - ضرورية لنشاط مبيد الجراثيم.

أثناء الحضانة ، تتفاعل الأجسام المضادة مع البروتينات السطحية البكتيرية ، مما ينشط البروتينات التكميلية لتكوين C5 convertase ، الذي يشق C5. يرتبط C5b ب C6 ، يليه C7 ، لتشكيل مجمع C5b6-7. يرتبط هذا المركب بغشاء الخلية البكتيرية ويجند C8 ، مكونا C5b67-8.

تسهل هذه العملية ربط مونومرات C9 وبلمرتها ، مما يولد مركب هجوم الغشاء - هيكل مكون للمسام. تسبب هذه المسام تدفق الأيونات والماء ، مما يؤدي إلى تحلل البكتيريا.

في المقابل ، في الأنبوب مع المصل العادي ، يرتبط الفيترونكتين ببروتين سطحي بكتيري يتفاعل مع مركب C5b6-7 ومونومرات C9. تمنع هذه التفاعلات تجنيد C8 وبلمرة C9 ، مما يثبط تكوين مجمع هجوم الغشاء ويؤدي إلى بقاء البكتيريا.

خذ المعلق البكتيري من كل من الأنابيب والمزرعة على ألواح أجار فردية.

تؤكد المستعمرات البكتيرية الأعلى في المصل المحتوي على فيترونكتين دوره في المقاومة البكتيرية ضد النشاط المبيد للجراثيم للمصل البشري.

لإجراء تحليل المقاومة المعتمدة على الفيترونكتين للنشاط المبيد للجراثيم للمصل البشري ، أولا ، استزراع البكتيريا وحبيبها كما هو موضح في بروتوكول النص. بعد الطرد المركزي ، أعد تعليق الحبيبات البكتيرية بحجم 1 من العازلة العازلة الفيرونالية للجيلاتين سكر العنب. أضف الآن 1,500 CFU من البكتيريا إلى 100 ميكرولتر من DGVB ++ يحتوي على مصل 5٪.

احتضان العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة مع الرج عند 300 دورة في الدقيقة. قم بإزالة كمية 10 ميكرولتر من خليط التفاعل في 0 دقيقة و 15 دقيقة. ضع اللقب على أجار الشوكولاتة ، واحتضن الطبق عند 37 درجة مئوية طوال الليل. بعد حضانة أطباق أجار الشوكولاتة ، قم بحساب المستعمرات التي تظهر على الطبق ، واحسب النسبة المئوية للبكتيريا المقتولة كما هو موضح في بروتوكول النص.