تقنية لتوليد جزيئات شبيهة بفيروس الأنفلونزا عبر نظام الثدييات

تحاكي الجسيمات الشبيهة بالفيروسات ، أو VLPs ، بنية الفيروس ولكنها تفتقر إلى المادة الوراثية الفيروسية ، مما يجعلها غير خبيثة. تمتلك VLPs حواتم مستضدية مرتبطة بالسطح تعترف بها الخلايا المناعية ، مما يجعلها مرشحة مثالية للقاح.

لتوليد VLPs المؤتلفة للأنفلونزا ، خذ نواقل التعبير حقيقية النواة.

يحتوي ناقلان على جينات ترميز للهيماجلوتينين ، أو HA ، والنورامينيداز ، أو NA - البروتينات الهيكلية لفيروس الأنفلونزا. يحتوي الناقل الثالث على جين الكمامة ، الذي يشفر البروتينات الأساسية لفيروس نقص المناعة البشرية.

أضف كاشف تعداء قائم على الدهون الكاتيونية. تتفاعل مجموعة الرأس الدهنية الموجبة الشحنة مع الحمض النووي سالب الشحنة ، وتشكل طبقة ثنائية حول النواقل - مما يؤدي إلى تكوين مجمعات تعداء الجسيمات الشحمية.

أضف مجمعات إلى الخلايا المضيفة للثدييات المستزرعة المناسبة لإنتاج VLP ، واحتضنها. تدخل مجمعات التعدي إلى الخلايا من خلال الالتقام الخلوي - يندمج غشاء الجسيم الشحمي مع الغشاء الداخلي لإطلاق النواقل في السيتوبلازم.

تدخل النواقل إلى النواة ، مما يؤدي إلى التعبير عن الجينات الفيروسية. عند تخليق HA و NA على الشبكة الإندوبلازمية ، تنتقل البروتينات إلى غشاء البلازما عبر المسار الإفرازي.

يتم تصنيع البروتينات الأساسية في السيتوبلازم ونقلها إلى موقع التجميع لترسيخها في غشاء البلازما. تخضع المكونات الفيروسية المتراكمة للتجميع الذاتي في VLPs والبراعم من الخلية المضيفة.

حصاد VLPs التي تم إصدارها للمعالجة النهائية

في يوم التعدي ، قم بإعداد محاليل الجسيمات الشحمية والحمض النووي وفقا لتوصيات الشركة المصنعة. قم بنقل خلايا الحمض النووي بتكوين DNA 1: 1: 2 من HA: NA: Gag وكمية إجمالية من الحمض النووي تبلغ 40 ميكروغراما لكل قارورة T-150. كرر هذه الخطوة لإنشاء تسعة قوارير T-150 بحجم إجمالي يبلغ 200 مل.

بعد ذلك ، قم بتخفيف محاليل الحمض النووي والشحميات في وسائط تعداء خالية من المصل بدون مضادات حيوية بحيث تحتوي كل قارورة على حجم إجمالي يبلغ 24 ملليلترا. أعد القوارير إلى الحاضنة وحافظ على الخلايا في وسط ثقافة التعداء حتى يوم الحصاد للجسيمات الشبيهة بالفيروسات أو VLP.

انقل المادة الطافية إلى أنابيب مخروطية سعة 15 مليلتر لحصاد المزرعة من الخلايا بعد 72 إلى 96 ساعة بعد التعداد. قم بتدوير الخلايا لأسفل لتكسير الحطام الخلوي. اجمع المواد الطافية وقم بتصفيتها من خلال غشاء مسام 0.22 ميكرون.