الحقن تحت الجلد للمستضد البكتيري للحث على التهاب جهازي في نموذج الفئران

للحث على الالتهاب الجهازي — استجابة التهابية واسعة الانتشار، ابدأ بوضع فأر مخدر مع وضع جانبه الظهري لأعلى. خذ حقنة تحتوي على مستحلب البكتيريا الفطرية لمستودعات مستضد البكتيريا الفطرية - وهو خزان زيت موضعي لخليط المستضد المساعد.

اثقب طبقات بشرة الفأر وطبقات جلد الأدمة وحقن المستحلب المساعد تحت الجلد القريب من العقدة الليمفاوية الأربية. بعد الحقن ، يطلق المستودع المستضدات باستمرار في الأنسجة المحيطة - مما يوفر تعرضا طويلا للمستضدات لجهاز المناعة.

تتفاعل الخلايا العارضة للمستضد ، أو APCs ، في الأنسجة ، مع المستضدات الفطرية المحقونة ، وتستوعبها وتعالجها في الببتيدات. ثم يتم تقديم هذه الببتيدات على سطح APCs باستخدام مجمعات التوافق النسيجي الرئيسية ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكينات والكيموكينات المؤيدة للالتهابات.

تولد هذه العملية التهابا موضعيا وتؤدي إلى فتح الأوعية اللمفاوية ، مما يتيح دخول الخلايا المناعية بما في ذلك APCs الحاملة للمستضد إلى الجهاز اللمفاوي والوصول إلى العقدة الليمفاوية الأربية.

في الغدد الليمفاوية ، تتفاعل مستقبلات الخلايا التائية للخلايا التائية المساعدة مع المستضدات الموجودة على سطح APCs وتصبح نشطة. تطلق الخلايا التائية المنشطة السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، والتي تنتقل عبر الأوعية اللمفاوية ويتم إطلاقها في أنسجة أخرى مختلفة.

تجذب السيتوكينات المؤيدة للالتهابات التي تم إطلاقها الخلايا المناعية إلى هذه الأنسجة ، مما يؤدي إلى التهاب جهازي.

للبدء ، قم بفك جسم وحدة محول الصوتنة وتنظيف المسبار بمسحة كحول بنسبة 70٪. بعد ذلك ، قم بتشغيل الصوتنة ، واضبط إعداد الطاقة على 4 ، عن طريق تدوير مقبض التحكم في الطاقة.

بعد ذلك ، لتوليد معلق ناعم لبكتيريا السل H37Ra في PBS ، اغمر طرف المسبار في مسحوق البكتيريا الفطرية المحتوية على PBS. قم بتقطيع الخليط على الثلج لمدة 30 ثانية ، ثم توقف مؤقتا لمدة 30 ثانية ، وكرر ذلك لمدة 5 دقائق لتفريق المسحوق بالكامل في تعليق متساو دون تسخين السائل. بعد ذلك ، أضف 2.5 مل من مساعد فرويند غير المكتمل إلى الخليط ، وكرر عملية الصوتنة على الثلج حتى يشكل المستحلب تناسقا يشبه معجون الأسنان.

للحقن تحت الجلد ، قم بتحميل 200 إلى 300 ميكرولتر من مستحلب البكتيريا الفطرية في حقنة سعة 1 ملليلتر. طرد الهواء من المحقنة ، واستمر في ملء المحقنة ، مع التقليب المتقطع والتنصت ، حتى تمتلئ.

بعد ذلك ، ضع الحقن تحت الجلد إما على السطح الظهري للوركين ، أو على السطح البطني للساقين القريبة من منطقة الغدد الليمفاوية الأربية لفأر C57Black / 6J البالغ من العمر 6 إلى 10 أسابيع. أدخل الإبرة بعناية ، مع الحرص على عدم اختراق العضلات ، وحقن 50 ميكرولترا من المستحلب في الفضاء تحت الجلد. لا تقم بإزالة الإبرة على الفور للسماح بحقن المستحلب السميك بالكامل.