موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:06 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بثقافة مذابة من المتفطرة بوفيس BCG lux ، وهي سلالة مضيئة بيولوجيا معدلة وراثيا من المتفطرة الموتنة التي تعبر عن إنزيم لوسيفيراز المراسل.
تلقيح المعلق في قارورة مزرعة تحتوي على وسط النمو المكمل بالمضادات الحيوية الهيغروميسين. حضن. يحتوي BCG lux على الجين المقاوم للهيجروميسين ، مما يسهل بقائه ونموه.
بعد الحضانة ، قم بإعداد تخفيفات ثقافية مناسبة باستخدام عازل في أنابيب مقياس الإضواع. نقل إلى مقياس الإضاءة ، المحمل بمحلول ركيزة ألدهيد أليفاتي طويل السلسلة. أثناء الجري ، يتم حقن الألدهيد في معلق البكتيريا الفطرية الذي يدخل الخلايا.
يحفز اللوسيفيراز البكتيري أكسدة أحادي النوكليوتيد الفلافين المختزل الداخلي والألدهيد ، مما يؤدي إلى انبعاث الضوء الأزرق والأخضر. تشير شدة التلألؤ البيولوجي المقاسة إلى النشاط الأيضي ل BCG lux وترتبط بقياس البكتيريا القابلة للحياة أو الوحدات المكونة للمستعمرة ، CFU.
بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي لثقافة البكتيريا الفطرية المتبقية. أعد تعليق الحبيبات الفطرية في مخزن مؤقت يحتوي على خافض للتوتر السطحي غير أيوني لمنع تكتل البكتيريا الفطرية.
باستخدام قياسات التلألؤ البيولوجي ، قم بتخفيف المعلق للحصول على كثافة الخلية المطلوبة. قم بإعداد التخفيفات التسلسلية للبكتيريا الفطرية ووضعها على ألواح أجار المغذيات المكملة بالهيغرومايسين. احتضان ، مما يسمح ل BCG lux بتكوين
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية