JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:41 د • July 8th, 2025
ضع فأرا مخدرا على الوسادة الجراحية المعقمة المتصلة بوحدة التنفس مع تدفق مستمر للأكسجين وغاز مخدر.
باستخدام مرشح ، قم بتحميل المحقنة بالهواء المعقم. قم بتوصيل إبرة بالمحقنة وحقن الهواء المعقم تحت الجلد في الجزء الخلفي من الماوس لإنشاء كيس هواء داخل طبقات الأنسجة. راقب الماوس حتى الاسترداد.
أعد تخدير الفأر وقم بإعطاء عديدات السكاريد الدهنية LPS في كيس الهواء. يرتبط LPS بالمستقبل الشبيه بالحصيلة 4 ، TLR-4 على البلاعم المقيمة في الأنسجة والخلايا المتغصنة ، مما يؤدي إلى تنشيطها.
تطلق الخلايا المنشطة وسطاء التهابيين مختلفين مثل السيتوكينات والكيموكينات ، التي تجذب العدلات والخلايا المناعية الأخرى. تزيد هذه الوسطاء أيضا من نفاذية الأوعية الدموية للأوعية الدموية القريبة ، مما يمكن الخلايا المناعية والعوامل القابلة للذوبان من دخول كيس الهواء من مجرى الدم.
عندما يتراكم السائل داخل الكيس ، فإنه يشكل إفرازات تتكون من خلايا التهابية وجزيئات نشطة بيولوجيا مختلفة.
القتل الرحيم للماوس وحقن مخزن غسيل مناسب في كيس الهواء. اجمع الإفرازات الالتهابية في أنبوب الطرد المركزي الدقيق وجهاز الطرد المركزي. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في مخزن الغسيل.
تحليل الإفرازات الالتهابية لتحديد نسبة العدلات وتحديد مدى تسللها.
بعد تخدير الفئران في اليوم صفر ، استخدم مرشحا 0.22 ميكرون متصلا بحقنة سعة خمسة ملليلتر للحصول على حجم ثلاثة مليلتر من الهواء المعقم. ارفع الجلد الخلفي للفأر المخدر بالملاقط واستخدم تحت الجلد إبرة قياس 26 × 3/8 بوصة لحقن ثلاثة ملليلتر من الهواء المعقم.
بعد العلاج ، أخرج الفئران من وحدة التنفس وضعها في قفص جيد الإعداد. راقب الفئران للتأكد من أنها على قيد الحياة حتى تبدأ في الحركة. في اليوم الثالث ، قم بحقن ثلاثة ملليلتر إضافي من الهواء المعقم في الجيب الهوائي الذي تم إنشاؤه مسبقا للحفاظ على كيس الهواء.
في اليوم السادس، قم بحقن علاجات مختلفة في كيس الهواء. حقن ملليلتر واحد من PBS كعنصر تحكم سلبي ، وحقن مليلتر واحد من ميكروغرام واحد لكل مليلتر LPS كعنصر تحكم إيجابي للحث على الالتهاب الموضعي. بعد ست ساعات ، ضحي بالفئران.
لكل كيس هواء ، قم بحقن مليلتر واحد من محلول الغسيل لغسل كيس الهواء وجمع الإفرازات الالتهابية في أنبوب طرد مركزي سعة 15 ملليلترا. بعد ذلك ، اغسل كيس الهواء بملليلترين من محلول الغسيل مرتين ، واجمع الإفرازات الالتهابية في نفس أنبوب الطرد المركزي.
جهاز طرد مركزي عند 100 × جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق الخلايا في مليلتر واحد من محلول الغسيل. عد الخلايا لتحديد نسبة العدلات باستخدام محلل أمراض الدم التلقائي.