القياس الكمي لحمل هيليكوباكتر بيلوري في معدة الفأر المصابة

لتحديد استعمار هيليكوباكتر بيلوري في معدة الفأر المصابة ، ابدأ بأنسجة المعدة المسطحة التي تحتوي على الجسم ومناطق الغرور ، المعلقة في وسط المغذيات لدعم بقاء البكتيريا.

تجانس لتحطيم أنسجة المعدة مع الطبقة المخاطية ، وإطلاق هيليكوباكتر بيلوري من الأنسجة إلى الوسط. قم بإجراء عمليات تخفيف تسلسلية لتجانس المعدة الناتج باستخدام الوسائط.

احصل على أجار دم الحصان المجفف ، HBA ، لوحات مقسمة إلى أجزاء متعددة. يتم استكمال لوحات HBA بمزيج من المضادات الحيوية. انقل كل تخفيف متجانس إلى أجزاء منفصلة من اللوحة ووزعها بالتساوي.

بعد التجفيف ، ضع الألواح في وضع مقلوب داخل وعاء استزراع لاهوائي مرطب مع مخاليط غازية متخصصة. حضن.

تسهل البيئة الهوائية الدقيقة التي يوفرها جرة الاستزراع اللاهوائية جنبا إلى جنب مع مغذيات HBA نمو هيليكوباكتر بيلوري وتشكيل مستعمرات. تمنع المضادات الحيوية الموجودة في HBA نمو الأنواع البكتيرية من الجراثيم المعدية الداخلية.

عد مستعمرات هيليكوباكتر بيلوري على أجزاء صفيحة HBA التي تقع ضمن نطاق محدد قابل للعد.

احسب حمل هيليكوباكتر بيلوري في أنسجة المعدة ، مما يشير إلى مدى الاستعمار البكتيري داخل الأنسجة.

لحساب عدد الملوية البوابية القابلة للحياة في المعدة بعد العدوى ، قم بتجانس عينات المعدة المخزنة في BHI ، وقم بإجراء تخفيفات تسلسلية مكررة لمجانسات المعدة الناتجة في مرق معقم طازج.

قسم أجار دم الحصان المجفف مسبقا ، أو ألواح HBA ، المكملة بالمضادات الحيوية الإضافية إلى ثلاثة أو أربعة أجزاء ، وباستخدام تكييف تقنية Miles and Misra ، أضف 10 إلى 100 ميكرولتر من كل تخفيف متجانس في المعدة على جزء من كل لوحة أجار. انشر المتجانسات بحلقات بلاستيكية معقمة واترك الألواح تجف. بعد ذلك ، ضع الألواح في وضع مقلوب في برطمانات غاز لاهوائية تحتوي على طبق بتري من الماء وعلبة غاز ، ثم احتضن البرطمانات عند 37 درجة مئوية لمدة أربعة إلى سبعة أيام.

عندما يمكن ملاحظة المستعمرات ، قم بتعداد الأجزاء التي تحتوي على ما بين 10 و 100 مستعمرة معزولة.