قياس تسلل الخلايا المناعية في أنسجة المثانة المصابة بالإشريكية القولونية المسببة للبول باستخدام قياس التدفق الخلوي

لتحديد كمية تسلل الخلايا المناعية في أنسجة المثانة الفئرانية المصابة بالإشريكية القولونية المسببة للمسالك البولية ، ضع الأنسجة المفرومة في مخزن مؤقت للهضم يحتوي على الكولاجيناز والديوكسيربونوكلياز.

احتضان مع الرج المنتظم لتعطيل الأنسجة.

يهضم الكولاجيناز المصفوفة خارج الخلية للأنسجة ، ويطلق الخلايا. يحلل منقوص الأكسجين نوكلياز الحمض النووي الحر المتداخل.

بعد الحضانة ، أضف عازلة بعامل مخلب ومصل بقري للجنين لتعطيل الإنزيمات الهضمية.

مرر الخليط المهضوم عبر مصفاة لإزالة بقايا الأنسجة والأنسجة الضامة ، والحصول على تعليق أحادي الخلية.

جهاز الطرد المركزي وإعادة تعليق الخلايا في مخزن مؤقت يحتوي على أجسام مضادة تحجب Fc. ترتبط هذه الأجسام المضادة بمستقبلات Fc للخلايا المناعية لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.

أضف الأجسام المضادة المضادة ل CD45 الموسومة بالفلوروفور ، والتي ترتبط ببروتين CD45 عبر الغشاء على الخلايا المناعية.

جهاز طرد مركزي وتمرير الخلايا المعلقة عبر مصفاة خلية لإزالة مجاميع الخلايا.

باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، قم بقياس إشارات التألق من الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور على الخلايا المناعية لتحديد كمية تسلل الخلايا المناعية في المثانة.

لإجراء قياس التدفق الخلوي على أنسجة المثانة ، بعد عزل المثانة كما هو موضح ، استخدم المقص لفرم الأنسجة جيدا. أضف 1 مثانة مفرومة لكل