JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:52 د • July 8th, 2025
خذ مزرعة عضو المشيمة البشرية المزروعة على مصفوفة خارج الخلية ، أو ECM.
تظهر الثقافة بنية تشبه الزغابات مع مخلوي خارجي - طبقة متعددة النوى - وأرومات الغاذية الخلوية الأساسية ، أو CBTs ، والتي تتمايز إلى أرومة غخامية خارج الزغابات ، أو EVTs ، التي ترتكز في ECM.
إدخال Listeria monocytogenes ، وهي بكتيريا مسببة للأمراض.
ترتبط الإنترنالين - البروتينات السطحية البكتيرية - بمستقبلات EVT ، مما يسهل استيعاب البكتيريا عن طريق الالتقام الخلوي.
تفرز البكتيريا الداخلية السموم المكونة للمسام والفوسفوليباز التي تثقب الغشاء الفراغي ، مما يتوسط في تمزقه وهروب البكتيريا إلى السيتوبلازم.
تقومالبكتيريا الهاربة بتجنيد الآلات المضيفة لبلمرة الأكتين ، مما يدفعها نحو غشاء الخلية المضيفة.
يؤديإفراز عامل الفوعة البكتيري إلى تكوين نتوء على الغشاء المضيف. تبتلع الخلايا المجاورة النتوء المحتوي على البكتيريا ، مما يتسبب في انتشار العدوى.
تنتشر البكتيريا عبر EVTs إلى العلاج المعرفي السلوكي الأساسي.
أضف مضادا حيويا لإزالة البكتيريا خارج الخلية ، وإعداد نموذج العدوى للتحليل.
قبل بدء العدوى ، قم بتلقيح مستعمرة L. monocytogenes واحدة من صفيحة أجار لتسريب الدماغ والقلب في 3 ملليلتر من مرق تسريب الدماغ والقلب. احتضان المزرعة طوال الليل في وضع مائل عند 30 درجة مئوية للسماح لنمو البكتيريا بالوصول إلى مرحلة ثابتة.
في صباح اليوم التالي ، استخدم ملاقط معقمة لإزالة أي قطع مزرعة أعضاء عائمة لم تغزو المصفوفة خارج الخلية ، وشفط الوسط بعناية من أسفل كل بئر. بعد ذلك، ضع الماصة برفق 1 ملليلتر من PBS الدافئ في الآبار العلوية والسفلية مرتين، مع إزالة كل غسلة بشفط دقيق.
بعد الغسيل الثاني ، قم بتقطيع 1 مليلتر من الوسط المناسب برفق إلى الآبار العلوية والسفلية مع الحرص على عدم إزعاج مزارع الأعضاء وإعادة الثقافات إلى الحاضنة لمدة ساعة واحدة.
في نهاية الحضانة ، استبدل الوسط الموجود في الجزء العلوي من الآبار ب 1 مليلتر من اللقاح ، ثم ضع الألواح مرة أخرى في حاضنة زراعة الخلايا لتسهيل الغزو البكتيري ، واستبدال كل الوسط في كل بئر يوميا.