JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:49 د • July 8th, 2025
ابدأ بصفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا أحادية النواة للدم المحيطي البشري ، أو PBMCs المشتقة من فيروس نقص المناعة البشرية ، أو متبرع مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية.
تحتوي PBMCs على خلايا مناعية مختلفة ، بما في ذلك الخلايا التائية الإيجابية CD4 المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية مع الحمض النووي الفيروسي المتكامل.
قم بزرع الآبار بمزيج من كريات الدم الحمراء المتطفلة المتصورة المنجلية ، أو PfRBCs - التي تعبر عن المستضدات المشتقة من الطفيليات ، وكرات الدم الحمراء غير المصابة.
أثناء الحضانة ، تتفاعل مستضدات PfRBCs مع مستقبلات الخلايا المناعية ، وتنشطها وتطلق السيتوكينات.
تؤديهذه السيتوكينات إلى إرسال إشارات مجرى النهر في خلايا CD4 T ، مما يؤدي إلى نسخ الحمض النووي الفيروسي لفيروس نقص المناعة البشرية وتخليق الحمض النووي الريبي الفيروسي الجديد.
تشكلالحمض النووي الريبي الفيروسي وبروتينات فيروس نقص المناعة البشرية جزيئات الفيروس التي تتبرعم ، وتصيب خلايا CD4 T الجديدة وتنشر عدوى فيروس نقص المناعة البشرية.
تعطل العدوى التدريجية بفيروس العوز المناعي البشري إفراز السيتوكين ، وتضعف الاستجابة المناعية ضد كرات الدم البكتيرية الكريمة الحمراء وتؤدي إلى عدوى الملاريا المستمرة.
بمرور الوقت ، تطلق كرات الدم الحمراء المصابة طفيليات تغزو كرات الدم الحمراء الجديدة ، وتتكاثر طفيليات الملاريا وتنشئ نموذج زراعة الخلايا المصاحبة للعدوى الملاريا وفيروس العوز المناعي البشري.
لإعداد مزارع العدوى المشتركة ، ابدأ بزرع 1 × 106 من PBMC المعزولة حديثا الإيجابية لفيروس نقص المناعة البشرية والسلبية لفيروس نقص المناعة البشرية في 100 ميكرولتر من RPMI-S + لكل بئر في صفيحة 24 بئرا. ارفع الحجم الإجمالي لكل بئر إلى 500 ميكرولتر مع 400 ميكرولتر من RPMI-S +.
بعد ذلك ، في ثلاث نسخ وبحجم إجمالي قدره 500 ميكرولتر لكل بئر ، أضف 3 × 106 خلايا دم حمراء غير مصابة أو 3 × 106 خلايا دم حمراء متطفلة إلى الخلايا المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية وغير المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. ضع لوحة العدوى المشتركة في حاضنة زراعة الخلايا.
بعد ذلك ، بعد الفترة الزمنية التجريبية المناسبة ، قم بتكسير الخلايا ، واجمع 700 ميكرولتر من المادة الطافية المزروعة من كل بئر. جهاز الطرد المركزي للطافي لإزالة أي حطام. ثم ، قم بتقسيم العينات حسب الاقتضاء ؛ قم بتسمية الأنابيب وقم بتجميدها عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر أو أقل لتحليلها لاحقا.