نظام مراسل الفيروسات المؤتلف في المختبر للكشف عن العدوى الفيروسية

خذ مزرعة خلايا سرطان الكبد البشري المعدلة وراثيا للتعبير عن بولي ببتيد التوروكولات الصوديوم أو NTCP - مستقبل عبر الغشاء.

أضف فيروس التهاب الكبد B المؤتلف أو فيروس التهاب الكبد B يتكون الفيروس من غلاف خارجي يحتوي على بروتينات سطحية ونيوكليوكابسيد داخلي يحيط بالجينوم. يمنع إدخال جين مراسل لوسيفيراز القدرة الإنجابية للفيروس.

يرتبط بروتين الغلاف الفيروسي بمستقبل NTCP للخلية المضيفة.

يتفاعل NTCP مع مستقبلات عامل نمو البشرة ، EGFR ، وقلة القلة ، مما يؤدي إلى الالتقام الخلوي للفيروس بوساطة EGFR.

يندمج الغلاف الفيروسي مع الغشاء الداخلي لإطلاق النوكليوكابسيد ، الذي يتفكك في مركب المسام النووية.

يدخل الجينوم الفيروسي إلى النواة ويتحول إلى DNA دائري مغلق تساهميا أو cccDNA - قالب مستقر - يشفر البروتينات الفيروسية ، بما في ذلك لوسيفيراز.

على فترات محددة مسبقا ، قم بحصاد الخلايا والليز لإطلاق لوسيفيراز داخل الخلايا.

تقديم ركيزة المراسل. يؤكسد لوسيفيراز الركيزة ، مما ينتج عنه إشارة.

تشير

الزيادة بعد الإصابة في نشاط لوسيفيراز إلى التعبير المستمر عن الجينوم الفيروسي.

خلايا لوحة HepG2 ، تعبر بثبات عن توروكولات الصوديوم ، أو بولي ببتيد النقل المشترك ، أو NTCP المعرضة للإصابة بعدوى فيروس التهاب الكبد B ، وتحتضن عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2.

قبل يوم واحد من الإصابة ، قم بوضع ما يقرب من 5