تقنية للحث على جفاف العين المناعي الذاتي التجريبي المزمن في الفئران

خذ فأرا تم تحصينه مسبقا بمستحلب مساعد مستضد يحتوي على مستضدات ذاتية مشتقة من الغدة الدمعية ومستضدات غريبة.

أعد حقن المستحلب وحقن سم السعال الديكي داخل الصفاق ، مما يضمن أقصى تنشيط للخلايا التائية.

تتمايز الخلايا المنشطة إلى خلايا تائية للذاكرة المستجيبة المنتشرة ، و TEMs وخلايا ذاكرة تائية مقيمة في الأنسجة ، TRMs. توجد نسبة مئوية من TRMs في الأنسجة السطحية للعين.

بعد فترة زمنية محددة ، قم بحقن المستضدات في الملتحمة السفلية والغدد الدمعية ، مما يؤدي إلى التهاب موضعي.

تقدم الخلايا العارضة للمستضد تحت الملتحمة ، APCs ، مستضدات إلى TRMs ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكين.

تحفز السيتوكينات الخلايا الظهارية الملتحمة على إطلاق الكيموكينات ، والتي تجند TEMs.

تعيد APCs تنشيط TEMs المخللة ، مما يؤدي إلى إطلاق السيتوكين المسببة للالتهابات.

تسبب السيتوكينات موت خلايا كأس الملتحمة المنتجة للميوسين ، وتقليل مستويات الميوسين ، والتسبب في عدم استقرار الأغشية المسيل للدموع.

تحفز السيتوكينات موت خلايا الغدة الدمعية - مما يقلل من إنتاج الدموع - وتحفز الخلايا الظهارية للقرنية على إنتاج البروتينات المعدنية المصفوفة ، مما يؤدي إلى إتلاف القرنية.

تقييم الجرذ للسمات السريرية التي تشير إلى تحريض جفاف العين الناجح.

في اليوم صفر ، قم بتوزيع 200 ميكرولتر من المستحلب الذي يحتوي على 1 ملليغرام من مستخلص الغدة الدمعية و 200 ميكروغرام من البيضا ، وأكمل مساعد فرويند في محاقن Luer-lock سعة 1 مليلتر ، وقم بتجهيز المحاقن بإبر قياس 27.

بدون استخدام التخدير ، قم بحقن المستحلب تحت الجلد في قاعدة ذيول الفئران. ثم ، في اليوم 14 بطريقة مماثلة ، قم بحقن 200 ميكرولتر من نفس المستضد ومساعد فرويند غير المكتمل. في نفس اليوم ، قم بحقن 300 نانوجرام من سم السعال الديكي داخل الصفاق في 100 ميكرولتر من PBS.

في اليوم 48 ، قم بوزن الكمية المطلوبة من البيضا وقم بإذابتها في PBS ، ثم امزج البيضا مع مستخلص الغدة الدمعية المذابة المحضر سابقا في هذا الفيديو ، مما يجعل محلول المستضد يحتوي على 1 ملليغرام لكل مليلتر من البيضافي و 1 ملليغرام لكل مليلتر من مستخلص الغدة الدمعية.

بعد تخدير الفئران ، قم بحقن 5 ميكرولترات من المستضد في الملتحمة السفلية للعين ، ثم قم بحقن 20 ميكرولترا من المستضد في الغدة الدمعية.