قياس هجرة الخلايا القاتلة الطبيعية استجابة للمنبهات الكيميائية

ابدأ بإضافة المواد الجاذبة للمواد الكيميائية ، مثل الكيموكين ، في طبق متعدد الآبار.

ضع غرفة نفاذة للبئر بحجم مسام مناسب في البئر. أضف معلق الخلية القاتل الطبيعي ، أو NK ، إلى الغرفة العلوية واحتضنها.

تنتشر بعض جزيئات الكيموكين عبر الغشاء وترتبط بمستقبلات الخلايا القاتلة الطبيعية. يؤدي هذا إلى مسارات الإشارات التي تعزز تغيرات الهيكل الخلوي ، مما يؤدي إلى حركة الخلية الاتجاهية نحو تركيز الجاذب الكيميائي الأعلى في الغرفة السفلية.

بعد الحضانة ، انقل حجما ثابتا من الخلايا المهاجرة من الغرفة السفلية إلى فرز الخلايا المنشط بالفلورة أو أنبوب FACS. أضف عددا محددا مسبقا من حبات عد الفلورسنت وقم بإجراء عد الخلايا المستند إلى FACS.

باستخدام الصيغة التالية، حدد العدد المطلق لخلايا NK التي تم ترحيلها في العينة.

يعطي المخطط النقطي عدد حبات العد والخلايا المنفصلة كمناطق متميزة ، بناء على خصائص التألق والمبعثر.

لقياس هجرة الخلايا القاتلة الطبيعية استجابة للمنبهات الكيميائية ، اجمع خلايا NK البشرية من 70٪ إلى 80٪ مزرعة ملتقية ، وأعد تعليق الخلايا عند 2.5 × 10⁶ خلايا لكل مليلتر من تركيز وسط زراعة الخلايا القاتلة الطبيعية الخالي من المصل. بعد ذلك ، أضف 600 ميكرولتر من الوسط الخالي من المصل الذي يحتوي على الجاذب الكيميائي للخلايا القاتلة الطبيعية ذات الأهمية لكل بئر.

ووضع ملحق ثقافة واحد قطره 6.5 ملم مع مسام 5 ميكرومتر في كل بئر متوسط. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من الخلايا القاتلة الطبيعية إلى المقصورة العلوية لكل ملحق ، وضع اللوحة في حاضنة زراعة الخلايا لمدة أربع ساعات.

في نهاية الحضانة ، انقل الحجم الكامل للخلايا المهاجرة غير الملتصقة من قاع كل بئر إلى أنابيب FACS فردية سعة 5 ملليلتر ، وأضف 15 ميكرولترا من عدد محدد مسبقا من حبات عد قياس التدفق الخلوي إلى كل أنبوب. بعد ذلك ، باستخدام مقياس التدفق الخلوي ، قم بتقييم كل عينة خلية وفقا لبروتوكولات تحليل قياس التدفق الخلوي القياسية ، واحسب العدد المطلق لخلايا NK المهاجرة باستخدام الصيغة.