تحليل كثرة الخلايا الزعترية المبرمج بواسطة البلاعم البريتونية

كثرة الخلايا البلعمية هي العملية التي تقوم بها الخلايا البلعمية بإزالة الخلايا المبرمجة.

لتحليل كثرة الخلايا ، احصل على الخلايا الزعترية الفأرية المبرمجة. احتضان مع صبغة CFSE نفاذية للخلية.

تشق الإسترازات داخل الخلايا CFSE إلى صبغة فلورية غير منفذة للخلايا ، مما يؤدي إلى تلطيخ الخلايا الزعترية. أضف السيروم المعطل بالحرارة لمنع البقع الزائدة.

ضع الخلايا الزعترية الملطخة على طبق ثقافة. أضف ستاوروسبورين ، وهو مثبط لبروتين كيناز ، والذي يعطل سلسلة الإشارات الخلوية الحرجة ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج. علاوة على ذلك ، تنتقل بقايا الفوسفاتيديل سيرين إلى النشرة الخارجية لغشاء الخلية ، وتعمل ك "إشارات أكلني".

أضف تركيزات الخلايا الزعترية المبرمج المتزايدة إلى آبار الصفائح متعددة الآبار التي تحتوي على البلاعم البريتونية المنشطة للفأر ، والتي تعبر عن مستقبلات معينة من التيروزين كيناز.

تربط هذه الكينازات الفوسفاتيديل سيرين المكشوف بالخلايا الزعترية المبرمج ، مما يسهل استيعابها بواسطة الضامة.

بعد الحضانة ، قم بإزالة الخلايا الزعترية المبرمجة العائمة بحرية. أضف الأجسام المضادة ل CD11b الموسومة بالفلوروفور ، والتي ترتبط بجزيئات CD11b من البلاعم.

باستخدام المجهر الفلوري ، لاحظ الخلايا الزعترية المبرمجة الفلورية داخل البلاعم الفلورية المختلفة ، مما يشير إلى كثرة التجوي.

تظهر

الآبار ذات التركي