تصوير إنزيم المراسل الفلوري لتتبع العدوى البكتيرية في الجسم الحي

تعريض الفأر لقطرات الهباء الجوي التي تحتوي على المتفطرة السلية.

تصل البكتيريا إلى تجويف الحويصلات الهوائية - الأكياس الهوائية الصغيرة داخل الرئتين - التي تحتوي على الضامة.

ترتبط مستقبلات التعرف على نمط البلاعم بالأنماط الجزيئية المرتبطة بممرض الأمراض على البكتيريا ، مما يؤدي إلى ابتلاعها في البلعمة.

تفرز البكتيريا المبتلعة بروتينات متخصصة تمزق غشاء البلعمة. تهرب البكتيريا إلى السيتوبلازم وتتكاثر.

بعد الإصابة ، تخدير الفأر. قم بإدارة ركيزة مراسل من إنزيم β-لاكتاماز البكتيري داخل الصفاق لتصوير إنزيم المراسل أو التصوير المرجعي.

تصل

الركيزة إلى الحويصلات الهوائية الرئوية عن طريق الدورة الدموية وتدخل الخلايا المصابة.

يخترق الغشاء الخارجي البكتيري للوصول إلى الفضاء المحيط بالبلازما الذي يحتوي على β-lactamase.

تحتوي الركيزة على حلقة β-lactam تربط بين الفلوروكروم والمروية. بسبب القرب ، يتم امتصاص مضان الفلوروكروم بواسطة المروية.

يقوم β-lactamase بتحلل حلقة β-lactam ، مما يؤدي إلى إطلاق الفلوروفور ويؤدي إلى انبعاث التألق.

قم بتصوير التألق لتقييم العدوى الفطرية.

للمضي قدما ، قم بتحميل ذات الوزن المعروف في غرفة التلقيح التي تعمل بالطاقة. يمكن أن تتسع الغرفة لما يصل إلى 90 فأرا. ثم أغلق جميع المزالج الموجودة على الباب. بعد ذلك ، قم بتوصيل البخاخات باستخدام مشبك فولاذي. ثم اضغط على زر البدء في الغرفة ، واضبط معدل تدفق الهواء على ما بين 3 و 5 لترات في الدقيقة.

سوف يتدفق الهواء المضغوط بحوالي 22 إلى 26 رطلا لكل بوصة مربعة ، والأهم من ذلك ، يجب أن يكون من الممكن رؤية ضباب اللقاح في الغرفة. بعد 15 دقيقة ، سيظهر ضوء أحمر في مقدمة لوحة التحكم ، وستشير إشارة مسموعة إلى نهاية التشغيل. ثم اضغط على زر إعادة الضبط لإعادة ضبط المؤقتات. لتحرير الفراغ ، اضغط على الزر الأحمر الصغير الموجود على باب الغرفة.

ثم افتح باب الغرفة وأعد الفئران إلى أقفاص منازلها. من الآن فصاعدا ، احتفظ بالحيوانات في غرفة الاحتواء. بعد ذلك ، أعد البرطمان الموجود في حاوية النقل إلى خزانة السلامة الحيوية. هناك ، تخلص من المعلق البكتيري المتبقي في حاوية نفايات مخصصة. بعد ذلك ، ضع جرة البخاخات المستخدمة داخل كيس بيولوجي وأغلق الكيس لنقله إلى الأوتوكلاف.

لتنظيف الغرفة ، رش الأسطح الداخلية بالفينول المخزن و 70٪ الإيثانول. اسمح لهذه المحاليل بالتفاعل على تلك الأسطح لمدة 10 دقائق ، ثم امسحها جيدا. تخلص من جميع المناديل المبللة في سلة المهملات البيولوجية. بعد ذلك ، قم بتعقيم سلة المهملات وحاوية النفايات وبرطمانات البخاخات المستخدمة.

انقل إلى غرفة التصوير. هناك ، قم بتخدير وفقا لبروتوكول النص وحقنه بركيزة التباين عن طريق الحقن داخل الصفاق. في برنامج نظام التصوير ، قم بتهيئة النظام وتابع عندما يتحول شريط درجة الحرارة إلى اللون الأخضر. بعد تهيئة النظام ، ضع الماوس في غرفة التصوير.

تأكد من وجود فتحات الأنف داخل مخروط الأنف حتى يتلقى مخدرا أثناء التصوير. الآن ، عد إلى الكمبيوتر. في لوحة التحكم في الاستحواذ ، حدد إما التألق ، أو transillumination ، لتصور بالكامل ، أو إضاءة epi لعرض أنسجة الرئة. بالنسبة لماوس واحد، اضبط مجال الرؤية على B ومستوى المصباح على مرتفع.

للتعريض الضوئي ، استخدم الوقت التلقائي ، والتجميع المتوسط ، واثنين أو ثلاثة ل F / Stop. بعد ذلك ، اضبط مرشح الإثارة على 745 نانومتر ومرشحات الانبعاث من 780 إلى 840 نانومتر. بعد ذلك ، انتقل إلى إعداد التسلسل وحدد من 9 إلى 12 نقطة إضاءة في منطقة الاهتمام. الآن ، اضغط على زر الاستحواذ لجمع الصور.