موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:30 دقيقة • July 8th, 2025
تحت المجهر المجسم ، راقب العضيات المعدية ، والهياكل الخلوية ثلاثية الأبعاد المكونة من خلايا المعدة المتمايزة ، والخلايا الجذعية.
أدخل حاقن دقيق محملا ببكتيريا الملوية البوابية ، وهو أحد مسببات الأمراض في المعدة.
أدخل الإبرة في الجهاز العضوي المستهدف وحقن المعلق البكتيري.
لاحظ أن محلول غائم يتطور داخل التجويف.
يستخدمH.pylori بروتينا لاصقا محددا على سطحه للارتباط بمستقبلات خلايا المعدة ، مما يؤدي إلى إنشاء تفاعل مستقر بين البكتيريا والخلايا المضيفة.
يؤديهذا التفاعل إلى استطالة الإفراز البكتيري pilus ، وهو هيكل كبير على شكل نفق يمتد نحو غشاء الخلية المضيفة.
يستخدم H.pylori إفراز بيلوس لحقن عوامل الفوعة ، بما في ذلك الجين المرتبط بالسمية للخلايا A أو CagA في الخلية المضيفة.
بمجرد دخوله الخلية ، يخضع CagA للفسفرة بواسطة كيناز الخلية المضيفة.
يقومCagA الفسفوري بإلغاء تنظيم شلالات الإشارات داخل الخلايا المتعددة التي تغير وظائف الخلية المضيفة ، مما يعزز التحول السرطاني.
اجمع العضيات المصابة لمزيد من التحليل.
لبدء الحقن المجهري للعضيات ، قم بحصاد بكتيريا الملوية البوابية وغسلها في وسط قاعدي وفقا للبروتوكولات القياسية. بعد قياسات الكثافة الضوئية لتحديد عدد البكتيريا ، قم بتخفيف المزرعة إلى 1 × 109 بكتيريا لكل مليلتر في الوسط القاعدي.
اسحب الشعيرات الدموية الزجاجية إلى إبرتين للحقن باستخدام مجتذب ماصة دقيقة، واحفظها في طبق بتري نظيف. ثم باستخدام الملقط ، قم بكسر طرف إبرة حقن واحدة لإنتاج فتحة يبلغ عرضها حوالي 10 ميكرومترات.
العمل على مجهر مجسم، يتم إعداده داخل غطاء مزرعة معقم، وإدخال الإبرة في حامل الحقن، وتثبيتها في المعالج الدقيق. خذ ما يقرب من 10 ميكرولتر من المحلول البكتيري في الإبرة. بعد ذلك ، ضع لوحة زراعة الخلايا المكونة من 4 آبار التي تحتوي على عضيات المعدة تحت المجهر المجسم.
بالتنقل باستخدام أداة المعالجة الدقيقة ، ضع الإبرة بالقرب من العضوية. أدخل الإبرة في العضوية بحركة واحدة سريعة ، ثم قم بحقن ما يقرب من 0.2 ميكرولتر من المحلول البكتيري في وسط العضوية. من خلال الخبرة ، يمكن حقن ما يقرب من 30 من أكبر العضيات في البئر في 5 دقائق. احتضان العضيات المحقونة للوقت المطلوب في حاضنة زراعة الخلايا.
في كثير من الأحيان ، سيكافح الأفراد الجدد في هذه التقنية لأنهم يجدون صعوبة في استهداف العضيات بكفاءة. تنمو عضيات المعدة في الفئران كيسية وهي الأسهل في الاستهداف. لذلك ، قد يكون حقن عضيات المعدة في الفأر ، على سبيل المثال ، صبغة ، ممارسة جيدة لهذه التقنية.