موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:13 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا ظهارية ملتصقة وقم بمعالجتها بطفرات Coxiella ذات علامات بروتين الفلورسنت الأخضر ؛ بعضها به طفرات في جين نظام إفراز النوع الرابع ، أو جين T4SS - وهو أمر بالغ الأهمية للنسخ المتماثل.
تتفاعل الطفرات التكاثرية مع الخلايا الظهارية ، مما يؤدي إلى ابتلاع كوكسيلا ، وتشكيل فجوة تحتوي على كوكسيلا ، أو CCV ، وتجنيد البروتين السكري الغشائي المرتبط بالليزوزوم -1 ، أو LAMP1 إلى CCV.
هذا يسهل إفراز البروتينات المستجيبة في سيتوبلازم الخلية عبر نظام إفراز النوع الرابع ، مما يعزز تكاثر البكتيريا.
لاتزال الطفرات المصابة بطفرات جينية T4SS غير متكررة.
بعد الحضانة ، قم بتلطيخ الخلايا بصبغة فلورية ، وإصلاحها ، واختراق غشاء الخلية.
إدخال الأجسام المضادة الأولية الخاصة ب LAMP1 التي تتفاعل مع بروتينات LAMP1 على CCV.
تراكب مع الأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات الفلورية الحمراء ، والتفاعل مع الأجسام المضادة الأولية ، بينما صبغة Hoechst تلطخ نوى الخلايا.
تحت مجهر التألق ، تشير الفجوات ذات اللون الأحمر الفلوري التي تحتوي على عدد أقل من Coxiella الخضراء بالقرب من النواة إلى تكرار معيب للطفرات Coxiella.
ومع ذلك ، فإن الفجوات التي تحتوي على العديد من Coxiella الخضراء داخل الخلايا تشير إلى النمو الناجح داخل الخلايا للطفرات Coxiella التكاثرية.
بعد تحضير تعليق خلية Vero من 10
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية