موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:19 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بتعليق Porphyromonas gingivalis ، البكتيريا المسببة للأمراض اللاهوائية.
أضف BCECF-AM ، وهي صبغة غير فلورية ونفاذة للخلايا.
تعملالاستيرازات السيتوبلازمية النشطة على تحلل الصبغة إلى شكل فلوري غير منفذ للخلايا ، مما يؤدي إلى تلطيخ البكتيريا.
الطرد المركزي. أعد تعليق البكتيريا في الوسائط اللاهوائية.
أضف البكتيريا المصنفة إلى آبار الصفائح متعددة الآبار التي تحتوي على أغطية مع خلايا بطانة بشرية ملتصقة.
احتضان في غرفة لاهوائية.
يرتبط الفيمبريا البكتيرية بمستقبلات سطح الخلية البطانية ، مما يؤدي إلى شلالات الإشارات داخل الخلايا.
هذا يؤدي إلى إعادة ترتيب الأكتين واستيعاب البكتيريا داخل البلعمة.
بعد الحضانة ، اغسل أغطية الغطاء بمخزن مؤقت لإزالة البكتيريا غير الداخلية.
قم بإصلاح الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد للحفاظ على الهياكل الخلوية. قم باختراق الخلايا بمنظف غير أيوني للوصول إلى الأهداف داخل الخلايا.
أضف الفالودين المسمى بالفلورسنت ، والذي يرتبط بخيوط الأكتين.
ضع الغطاء فوق وسط تثبيت يحتوي على DAPI ، مما يؤدي إلى تلطيخ الحمض النووي.
لاحظ البورفيروموناس اللثة الفلورية داخل الخلايا البطانية مع الأكتين الفلوري ، مما يؤكد استيعاب البكتيريا.
لتصور البكتيريا الداخلية ، أولا ، قم أولا بنقل الأغطية الزجاجية المعقمة داخل كل بئر من صفيحة مكونة من 12 بئرا. لوحة خمسة أضعاف 10 إلى أربعة HUVECs لك
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية