تقييم البورفيروموناس اللثة الداخلية في الخلايا البطانية المضيفة

أثناء عدوى Porphyromonas gingivalis ، ترتبط fimbriae الموجودة على البكتيريا اللاهوائية بمستقبلات محددة على الخلايا المضيفة.

يبدأ

هذا الارتباط شلالات الإشارات داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى إعادة ترتيب الأكتين واستيعاب البكتيريا داخل البلعمة.

لتقييم بقاء Porphyromonas gingivalis الداخلي داخل الخلايا البطانية في المختبر ، خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا بطانية ملتصقة بغطاء الغطاء.

أضف تعليق Porphyromonas gingivalis. احتضان لتسهيل الاستيعاب البكتيري.

قم بإزالة الوسائط وغسلها باستخدام عازل لاهوائي لإزالة البكتيريا غير الداخلية.

أضف وسائط تحتوي على مضادات حيوية غير منفذة للخلايا البطانية للقضاء على البكتيريا المرتبطة بالسطح.

احتضان بفاعل بالسطح خفيف لتحلل الخلايا البطانية ، وإطلاق البكتيريا دون التسبب في تحللها.

تمييع المحللة التي تم جمعها بالوسائط. تحضير التخفيفات التسلسلية للمحللة.

ضعي التخفيفات على ألواح أجار الدم. احتضان في ظل ظروف لاهوائية ل Porphyromonas gingivalis لتنمو وتشكل مستعمرات مرئية.

عد المستعمرات لتقييم قدرة Porphyromonas gingivalis على غزو الخلايا البطانية والبقاء على قيد الحياة.

بعد إصابة خلايا HUVEC ، اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام PBS اللاهوائية. بعد ذلك ، أضف 2 مل من وسط VEGF مكملا بتركيزات محسنة مسبقا من المضادات الحيوية إلى خلايا HUVEC. احتضان الخلايا لمدة ساعة واحدة. استنشق الوسط ، وأضف 2 مل من محلول الصابونين 1٪ في BHI إلى كل بئر. احتضن لمدة 15 دقيقة.

بعد ذلك ، اكشط الخلايا المحللة ، واجمع المحللة في أنبوب الطرد المركزي. خفف المحللة من 1 إلى 1 بوسط BHI ، ثم قم بإعداد التخفيفات التسلسلية بدءا من 1 إلى 100. لوحة 200 ميكرولتر من التركيزات المناسبة على ألواح أجار الدم. اسمح للبكتيريا بالنمو لمدة سبعة أيام في غرفة لاهوائية ، ثم عد المستعمرات.