تلطيخ الخلايا البكتيرية والتحضير للدراسات المناعية

ابدأ بأنبوب يحتوي على مزرعة بكتيرية في المرحلة الأسية ، مما يضمن بكتيريا موحدة ونشطة النمو للحصول على نتائج متسقة.

جهاز طرد مركزي لجمع الخلايا ؛ استنشاق المادة الطافية المحتوية على الحطام ، وإعادة تعليق الخلايا.

أدخل صبغة فلورية حمراء نفاذة للخلايا. تخترق جزيئات الصبغة غشاء الخلية البكتيرية وتصل إلى النواة ، وترتبط بالحمض النووي وتنقل مضان أحمر إلى البكتيريا.

جهاز طرد مركزي لتكوير البكتيريا الملطخة وشفط المواد الطافية المحتوية على الصبغة غير المنضمة.

أعد تعليق البكتيريا في وسط نمو للحفاظ على بقاء الخلية.

باستخدام مقياس ضوئي ، قم بقياس امتصاص المعلق البكتيري المخفف عند 600 نانومتر.

قارن قيمة الامتصاص بمنحنى قياسي لتحديد تركيز البكتيريا.

انقل الحجم المطلوب من المعلق البكتيري الملون إلى أنبوب جديد يحتوي على وسط نمو. هذا لتحقيق التركيز البكتيري المطلوب لعدوى الخلية المضيفة التي تمثل تعدد العدوى ، أو وزارة الداخلية.

البكتيريا الملطخة مع وزارة الداخلية المطلوبة جاهزة للدراسات المناعية.

أولا ، حصاد المزارع البكتيرية في مرحلة أسية عن طريق الطرد المركزي عند 13,000 مرة جم لمدة دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. بعد غسل بيليه الخلية بواحد مليلتر PBS ، أعد تعليق الحبيبات البكتيرية في مليلتر واحد PBS.

تحديد تركيزات المعلق البكتيري عن طريق قياس الكثافة البصرية عند 600 نانومتر. بعد ذلك ، لتلطيخ المعلق البكتيري ، أضف ميكرولترين من صبغة التلوين الخضراء أو الحمراء المركزة سعة 500 ضعف في مليلتر واحد من التعليق البكتيري لتخفيف الصبغة مرة واحدة. احتضان الخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة مع دوران لطيف في الظلام.

بعد 30 دقيقة ، قم بالطرد المركزي للبكتيريا الملطخة عند 13,000 مرة جم لمدة دقيقتين ، وأعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من PBS. اجمع الخلايا البكتيرية الملطخة عن طريق الطرد المركزي عند 13,000 مرة جم لمدة دقيقتين. أعد تعليق الحبيبات في مليلتر واحد من وسط F-12K الطازج ، وقم بقياس الكثافة البصرية لكل ثقافة عند 600 نانومتر. قم بتخفيف الثقافات بشكل لاحق إلى التركيزات المرغوبة ، بناء على تعدد العدوى وتركيز الخلية المضيفة.